论文部分内容阅读
背景：30%左右癫痫患者为难治性癫痫，难以控制的癫痫发作对患者的身体健康造成严重损害，其病死率显著高于正常人群水平。其早期诊断可以使患者及早寻求其他有效治疗措施。microRNA(miRNA)在血清中稳定存在，且在循环血中的表达谱随着机体生理病理情况的改变而发生变化，从而具有重要应用前景。外周循环血中的miRNA已作为一类新的生物标志物用于许多神经性疾病的诊断研究。我们推测miRNA在难治性癫痫患者血清中可能存在差异表达，从而成为一种潜在的生物标志物。
方法：首先采用全基因组测序的研究策略，运用HiSeq测序技术，选取30例难治性癫痫患者与30例药物有效性癫痫患者，运用IlluminaHiSeq2000测序技术测定两组患者混合血清中miRNA的表达谱。选取显著表达失调的miRNAs，进一步在30例难治性癫痫患者与30例药物有效性癫痫患者血清中，应用qRT-PCR的方法进行小样本复筛。之后，选取差异表达的miRNAs，在77例难治性癫痫患者、81例药物有效性癫痫患者和85名健康对照者中进行大样本验证，以获得在难治性癫痫患者血清中稳定异常表达的特异性血清miRNAs,通过ROC曲线等评价其临床诊断价值,探讨其作为临床诊断的生物学指标的可行性。
结果：通过全基因组测序筛选出15个与药物有效性癫痫组相比符合标准的差异表达的miRNAs(miR-194-5p,-204-5p,-221-5p,-301a-3p,-30b-5p,-342-5p,-3605-5p,-4446-3p,-598-3p,-874-3p,-889-3p，-574-5p,novel-mir-67，-451和-9)。运用qRT-PCR技术，对筛选出的miRNAs进行小样本复筛和大样本验证。最终结果显示，与药物有效性癫痫组和健康对照组相比，5种miRNA(miR-194-5p,-301a-3p,-30b-5p,-342-5p和-4446-3p)表达水平显著下降(p＜0.05)。其中miR-301a-3p敏感度及特异度最高(80.5%/81.2%),且其表达水平与癫痫严重度显著相关(r=0.604,P=6.2×10-9)。
结论：本研究证实了5种miRNAs在难治性癫痫患者血清中的表达显著失调，其中miR-301a-3p有可能成为新的无创的难治性癫痫早期诊断的潜在生物标志物。
方法：首先采用全基因组测序的研究策略，运用HiSeq测序技术，选取30例难治性癫痫患者与30例药物有效性癫痫患者，运用IlluminaHiSeq2000测序技术测定两组患者混合血清中miRNA的表达谱。选取显著表达失调的miRNAs，进一步在30例难治性癫痫患者与30例药物有效性癫痫患者血清中，应用qRT-PCR的方法进行小样本复筛。之后，选取差异表达的miRNAs，在77例难治性癫痫患者、81例药物有效性癫痫患者和85名健康对照者中进行大样本验证，以获得在难治性癫痫患者血清中稳定异常表达的特异性血清miRNAs,通过ROC曲线等评价其临床诊断价值,探讨其作为临床诊断的生物学指标的可行性。
结果：通过全基因组测序筛选出15个与药物有效性癫痫组相比符合标准的差异表达的miRNAs(miR-194-5p,-204-5p,-221-5p,-301a-3p,-30b-5p,-342-5p,-3605-5p,-4446-3p,-598-3p,-874-3p,-889-3p，-574-5p,novel-mir-67，-451和-9)。运用qRT-PCR技术，对筛选出的miRNAs进行小样本复筛和大样本验证。最终结果显示，与药物有效性癫痫组和健康对照组相比，5种miRNA(miR-194-5p,-301a-3p,-30b-5p,-342-5p和-4446-3p)表达水平显著下降(p＜0.05)。其中miR-301a-3p敏感度及特异度最高(80.5%/81.2%),且其表达水平与癫痫严重度显著相关(r=0.604,P=6.2×10-9)。
结论：本研究证实了5种miRNAs在难治性癫痫患者血清中的表达显著失调，其中miR-301a-3p有可能成为新的无创的难治性癫痫早期诊断的潜在生物标志物。