大鼠慢性颞叶癫痫海马全基因组miRNA表达谱与神经元凋亡的相关性研究

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目的:研究大鼠慢性颞叶癫痫海马全基因组microRNA(miRNA)的表达谱及差异表达的miRNA在神经元凋亡过程中的调节机制。材料与方法:应用大鼠杏仁核电刺激的方法建立癫痫持续状态后慢性颞叶癫痫模型,提取大鼠海马总RNA。然后应用高通量测序方法筛选差异表达的miRNA,然后通过qRT-PCR进行验证,并预测6个显著差异表达的miRNA(miR-455-3p、miR-345-3p、miR-423-3p、novelmiR-54、miR-365-5p和miR-296-5p)的靶基因。另外,应用尼氏染色(Nissl staining)测定海马神经元的存活情况,并应用TUNEL染色来测定海马神经元的凋亡情况。最后,通过免疫共沉淀法来验证差异表达的miRNA在RISC(RNA-induced silencing complex)小体中水平的变化,用免疫印迹法测定差异表达的miRNA与凋亡因子蛋白水平上的相关性。结果:在电刺激杏仁核建立的慢性颞叶癫痫模型中,发现了6个显著差异表达的miRNA(miR-455-3p、miR-345-3p、miR-423-3p、novelmiR-54、miR-365-5p和miR-296-5p)及其靶基因,并且验证了miR-423-3p和miR-296-5p的表达水平与凋亡因子caspase-3的活性呈明显的相关性。证实了miR-423-3p的靶基因caspase-6在慢性颞叶癫痫海马中表达显著降低。结论:miRNA参与了慢性颞叶癫痫所致的神经元凋亡的调节过程,其中miR-423-3p具有抗凋亡的作用。
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