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肺癌为全球癌症相关死亡的首要原因，位居男性及女性癌症相关死亡率首位，为最常见的恶性肿瘤之一。据统计，2018年美国预计新增肺癌患者23万例，其中预计15万例患者将死于肺癌[1]。截止目前，我国的肺癌主要治疗方式有放化疗、药物靶向治疗、手术治疗，但中晚期肺癌患者治疗效果不太理想，大部分中晚期患者5年生存率不足15%[2]。国际肺癌筛查项目统计可知，Ⅰ期肺癌患者手术后10生存率可高达88%，可见肺癌的准确诊断是降低肺癌患者死亡率的关键措施[3]。由于肺癌患者早期无明显特异性的症状，大部分患者确诊时均为中晚期，或已出现淋巴转移及发生局部侵袭。而目前肺癌的筛查手段有痰细胞学、胸部X线、肺部低剂量螺旋CT，其检查结果特异性差，灵敏度低，无法准确筛查肺癌。因此，发现一种肺癌诊断分子标记物为亟待解决的问题，而研究肺癌诊断的血清lncRNA分子标记物有助于肺癌的筛查及诊断。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）为不参与蛋白质编码且无开放性阅读窗的长度大于200nt的非编码RNA，在转录、转录后及翻译等多个层面发挥着重要作用，作为“分子诱饵”诱导特定蛋白结合[4-6]。近几年lncRNA的机制研究成为热点，已有部分研究表明lncRNA参与多种肿瘤的增殖、转移、凋亡及侵袭。有研究表明，lncRNA不仅存在肿瘤患者组织中，同时存在于外周血中，但目前lncRNA作为肺癌患者血清标记物的研究较少。目的：1、筛选人血清RNA提取的最佳方法。2、在6种候选内参基因中筛选出人血清RNA中稳定表达的最适内参引物。3、在数据库中挑选5种候选lncRNA基因，检测5种候选基因在肺癌患者血清中差异性表达情况，筛选出明显差异表达的基因，并分析临床诊断价值。 方法：1.本研究从内蒙古医科大学附属医院收集60例病理组织活检确诊的肺癌患者血清标本（其中20例肺腺癌，20例鳞癌，20例小细胞肺癌）和20例正常人血清标本，同时统计患者信息及详细临床资料。2.采用改良手工法、QIAGEN试剂盒法、TIANGEN试剂盒法提取血清中总RNA，Nano Drop2000检测以上3种方法提出总RNA的浓度及纯度。3.选择10例肺癌患者血清提取总RNA，通过实时荧光定量PCR法检测6个候选内参在肺癌患者血清中表达情况，采用geNorm、Norm Finder软件分析qPCR数据，评价6个候选内参基因在肺癌患者血清中的稳定性，筛选血清中稳定表达的最适内参基因。4.在NCBI、“The LncRNA and Disease Datebase”数据库和文献中挑选5个lncRNA候选基因，并在符合条件的60例肺癌患者血清（其中20例肺腺癌，20例鳞癌，20例小细胞肺癌）和20例正常人血清中，通过实时荧光定量PCR法检测5种lncRNA候选基因表达情况。5.统计分析数据采用SPSS22.0软件进行统计分析，当P＜0.05时认为差异具有统计学意义，并采用受试者工作曲线(ROC曲线)对血清lncRNA差异性表达的临床诊断价值进行分析。 结果：1.改良手工法提取的RNA纯度及浓度均高于QIAGEN试剂盒法及TIANGEN试剂盒法，差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.通过geNorm，Norm Finder计算6个候选内参基因表达稳定值M，表达稳定性由弱至强排序依次为GAPDH＜GUSB＜CYC＜HPRT1＜18SrRNA和β-actin。3.肺腺癌患者血清中ANRIL呈高表达（P＜0.01），平均表达倍数为8.415±0.1550；肺鳞状细胞癌血清中XIST呈高表达水平（P＜0.05），平均表达倍数为4.044±0.1569；肺小细胞癌患者血清中，ANRIL，SPRY4-IT1，XIST均高表达（P＜0.05），其平均表达倍数分别为1.571±0.09571，2.787±0.1371，1.437±0.09293。4.在对肺腺癌，鳞癌，小细胞癌血清lncRNA的联合筛查中，lncRNA ANRIL的AUC为0.966，灵敏度为83.3%，特异性为100%（P＜0.01）,具有较高临床诊断价值；XIST的AUC为0.818，灵敏度为81.8%，特异性为95.2%（P＜0.01），具有中等临床诊断价值。 结论：1.改良手工法提取血清总RNA的纯度和浓度优于试剂盒法。2.肺癌患者血清实时荧光定量PCR最适内参引物为β-actin。3.ANRIL在腺癌和小细胞癌症呈高表达，而在鳞癌中呈低表达水平；SPRY4-IT1在小细胞癌中的表达水平高于腺癌和鳞癌；XIST在鳞癌和小细胞癌表达水平较高，而在腺癌中表达呈下调趋势。根据5种lncRNA候选基因ANRIL，H19，HIF1A-AS1，SPRY4-IT1和XIST分别在肺腺癌，鳞癌和小细胞肺癌中的表达情况，筛选出3种差异表达的特异性lncRNA，即XIST，ANRIL，SPRY4-IT1。4.LncRNA ANRIL在肺腺癌、鳞癌，小细胞癌联合筛查中，具有较高的临床诊断价值；XIST在肺腺癌、鳞癌，小细胞癌联合筛查中，诊断价值中等。因此，可采取ANRIL和XIST联合作为肺癌分子诊断标记物。