【摘 要】
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目的:1.筛选具有产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)能力的乳酸菌株。2.研究产γ-氨基丁酸(GABA)的乳酸菌发酵酸枣仁前后总黄酮(TF)和总皂苷(TS)含量的变化。3.研究酸枣仁发酵液对睡眠剥夺小鼠下丘脑中5-HT、DA、GABA睡眠递质含量的影响。方法:1.利用乳酸菌筛选培养基从泡菜汁中成功分离筛选出乳酸菌。通过对菌种富集、分离筛选和发酵培养得到具有产GABA能
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目的:1.筛选具有产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)能力的乳酸菌株。2.研究产γ-氨基丁酸(GABA)的乳酸菌发酵酸枣仁前后总黄酮(TF)和总皂苷(TS)含量的变化。3.研究酸枣仁发酵液对睡眠剥夺小鼠下丘脑中5-HT、DA、GABA睡眠递质含量的影响。方法:1.利用乳酸菌筛选培养基从泡菜汁中成功分离筛选出乳酸菌。通过对菌种富集、分离筛选和发酵培养得到具有产GABA能力的乳酸菌,利用薄层层析法对该菌株产GABA能力进行定性分析,然后依次对菌种进行形态学、生理生化和分子生物学(16Sr DNA)鉴定,以上述鉴定手段并结合菌种系统发育树,最终确定所筛选的菌种为乳酸菌命名为LAB-CM201。建立定量测定GABA含量的Berthelot比色法,以LAB-CM201为出发菌株进行紫外线照射诱变,用致死率作为诱变条件参考指标,筛选出经诱变后产GABA含量最高的突变菌株,命名为LAB-CM201-6并作为后续进行酸枣仁发酵的菌株。2.建立高氯酸-香草醛的显色体系,采用紫外分光光度法测定酸枣仁中总皂苷的含量;以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠作为显色剂,采用紫外分光光度法测定酸枣仁中总黄酮的含量。分别以GABA、TS、TF含量为评价指标,采用单因素试验获得发酵酸枣仁的优选条件,进而研究乳酸菌CM201-6对酸枣仁发酵的影响。3.通过腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)建立小鼠失眠模型,采用随机数字表法将雄性ICR小鼠分成5组:空白对照组(Control)、阳性药物组(DXP)、模型组(Model)、酸枣仁组(SZR)、酸枣仁发酵液组(SZRFJ),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠下丘脑中5-HT、DA、GABA含量,评价酸枣仁发酵产物(SZRFJ)对小鼠睡眠的改善效果。结果:紫外诱变后的LAB-CM201-6较原始菌株LAB-CM201产GABA能力有所提高,由原来的0.37 g/L提高到0.66 g/L,是紫外诱变前的1.8倍,较出发菌株GABA含量提高了78%。TS含量由发酵前11.58(mg/g)提高至26.5(mg/g),发酵后的是发酵前的1.29倍,TF含量由发酵前4.17(mg/g)提高至13.2(mg/g),发酵后是发酵前的3.17倍;PCPA诱导的失眠小鼠模型组的5-HT、GABA浓度显著降低(P<0.05),而DA浓度显著增加(P<0.05);与Control组相比,DXP组、SZR组、SZRFJ组均可以提高失眠小鼠下丘脑中5-HT和GABA含量,降低DA含量(P<0.05)。与SZR组相比,SZRFJ组可以显著缩短失眠小鼠的睡眠潜伏期(P<0.05),延长小鼠的睡眠时间(P<0.05)。结论:酸枣仁经过LAB-CM201-6发酵后,其发酵产物中的TS和TF含量显著提高,SZRFJ可显著改变(P<0.05)由PCPA诱导引发失眠小鼠模型的5-HT、DA、GABA神经递质浓度,改善小鼠的失眠症状。
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