基于咽部微生物组学研究银翘散治疗儿童风热伤络型过敏性紫癜的机制

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目的:本研究采用16S rRNA测序、宏基因组测序方法,采集口腔唾液标本,对健康儿童和银翘散治疗前后过敏性紫癜(Henoch-Sch(?)nlein purpura,HSP)患儿的口腔微生物群进行研究,比较三组咽部微生物群的组成结构差别,以期发现与本病有关的特定微生物、相关功能基因,同时揭示银翘散治疗风热伤络型HSP的作用机制。方法:收集在本院儿科门诊或住院治疗的初发HSP病例,符合纳入标准,共20例,采集口腔唾液标本后,予以银翘散干预治疗2周后再次采集唾液标本,同时征集健康儿童20例作为正常对照组,采集唾液标本。共3组,60例,应用16S rRNA高通量测序,统计分析结果。分析16S rRNA测序结果,每组选出5例具有代表性样本,进行宏基因组测序。结果:1.基线数据分析:两个实验阶段,健康对照组和HSP组受试者在一般人口学资料基线情况比较无显著性差异(P>0.05),组间具有可比性;经银翘散治疗后,HSP患儿中医证候积分明显降低,具有统计学差异(P<0.05)。2.与健康儿童相比,HSP患儿咽腔菌群有明显变化,微生物丰度和多样性较高。HSP治疗后组与HSP治疗前组、健康对照组比较,α多样性(ACE指数、chao1指数、goods_coverage指数及observed species指数)升高。3.β多样性分析(PCoA、Anosim)表明,HSP治疗组和健康对照组咽部微生物群组成结构不同,在属水平,HSP组,卟啉单胞菌属(Porphyromonas,P<0.01)、梭杆菌属(Fusobacterium,P<0.05)、孪生球菌属(Gemella,P<0.01)、假丁酸弧菌属(Oribacterium,P<0.01)、毛螺旋菌属(Lachnoanaerobaculum,P<0.01)及颗粒链球菌属(Granulicatella,P<0.01)、小杆菌属(Dialister,P<0.01)丰度降低;而韦荣氏球菌科的巨球菌属(Megasphaera,P<0.01)和韦荣氏球菌属(Veillonella,P<0.01)、二氧化碳嗜纤维菌属(Capnocytophaga,P<0.05)及放线菌属(Actinomyces,P<0.01)丰度升高。4.通过宏基因egg NOG、KEGG功能差异分析,HSP组患儿咽部细菌群落功能主要集中在:复制、重组、修复、信号转导、外源性生物降解和代谢、碳水化合物代谢、脂质代谢、氨基酸代谢、其他氨基酸代谢、其他次级代谢产物的生物合成以及与疾病相关的抗生素耐药、抗肿瘤药等,而健康儿童咽部菌群功能主要集中在:环境适应性免疫和自身免疫。结论:1.咽部微生物群生态失调与HSP发病存在相关性。与健康儿童相比,HSP组患儿咽部菌群相对丰度和多样性升高。2.HSP患儿咽部微生物群落结构与健康儿童不同。3.银翘散颗粒通过作用于咽部微生物群治疗风热伤络型HSP可能为治疗的机制之一。4.HSP组与健康儿童组存在明显功能基因差异。
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