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低温是诸多非生物因素中对植物危害最为严重的胁迫因子之一,它极大地限制了植物正常代谢和分布地域。植物自身拥有一套抵低温的机制,例如改变生物膜的性质,渗透调节等,而这些代谢活动的改变都离不开抗寒基因的表达调控。CBF (CRT-binding factor)转录激活因子是一类受低温特异诱导的反式作用因子,它们可以调控多个抗寒基因启动子上的顺式作用元件,诱导启动子中含有这一调控元件的多个冷诱导基因的表达,从而激活植物体内的多种抗寒机制。因此,CBF基因的表达及调控机理的研究对于阐明植物的抗寒机理具有重要意义。在本研究中,我们克隆了兴安落叶松的CBF1同源基因序列,命名为LgCBF1,并调查了该基因的表达特性。兴安落叶松是我国东北、内蒙古林区以及华北、西南的高山针叶林的主要森林组成树种,在针叶树种中是最耐寒的,所以对LgCBF1基因的研究可为解明兴安落叶松的抗寒机理、开发其抗寒基因资源提供依据。另外,由于在检测LgCBF1表达特性的实验中需要一个稳定表达的内参基因,我们分离了兴安落叶松的肌动蛋白基因(LgAct),并对其基因结构和系统发育关系进行了分析。LgAct基因的分离对于以此基因为内参,研究兴安落叶松其他基因的表达和调控奠定了基础。该研究的主要结果如下:1.采用简并-PCR的方法克隆了兴安落叶松低温诱导转录因子LgCBF1基因序列,利用BLAST比对分析发现,该LgCBFl基因序列与其它物种CBF1基因间具有很高的同源性。2.采用半定量PCR的方法对LgCBFl基因在冷胁迫下(4℃)的mRNA表达量调查结果显示:在持续的冷胁迫下,LgCBFl被快速诱导。在低温处理6h后期表达量达到峰值,但在低温胁迫解除后(转移到22℃)30 mmin,其mRNA水平明显下降,这显示出CBF1基因在植物对抗冷胁迫的途径中的快速的调控机制。3.采用简并-PCR和RACE技术克隆了兴安落叶松的肌动蛋白基因(LgAct)。该基因cDNA全长1662 bp,编码377个氨基酸;基因组DNA长度约为2564 bp,包含4个内含子,5个外显子。所克隆的LgAct cDNA序列与GenBank中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在77%以上,氨基酸序列的相似性高达93%以上。根据高等植物肌动蛋白相似性构建的系统树显示,兴安落叶松肌动蛋白与挪威云杉肌动蛋白之间的亲缘关系较为密切,在进化中分化时间最为接近。