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第一部分小鼠ACRBP B细胞表位肽的设计、合成与鉴定目的:设计小鼠ACRBP蛋白的B细胞表位,并进行多肽合成与鉴定。方法:（1）采用10种生物信息学工具联合预测并设计小鼠ACRBP蛋白的B细胞表位;（2）生物信息学方法对所设计出的B细胞表位肽进行特异性、同源性和物理性质分析;（3）对所设计出的B细胞表位肽进行合成与纯化,高效液相色谱法验证其纯度,质谱法验证其分子量,选用匙孔血蓝蛋白和牛血清白蛋白作为偶联载体蛋白,与B细胞表位肽偶联,并测试其在几种常规溶质中的可溶性。结果:（1）设计出4条小鼠ACRBP B细胞表位肽,分别命名为P1、P2、P3与P4;（2）与其他小鼠蛋白相比,4条B细胞表位肽均具有ACRBP特异性;与人ACRBP相比,P1、P2和P3具有较高同源性,而P4同源性较低;同时得出4条B细胞表位肽的各项理论物理性质;（3）经合成与纯化后,4条B细胞表位肽的纯度均达到95%以上且分子量符合预期;4条B细胞表位肽均分别和牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白相偶联;偶联后的表位肽在超纯水和0.01 M磷酸盐缓冲液（p H 7.4）中均具有良好的可溶性,但不溶于二甲基亚砜。结论:成功设计并合成出4条小鼠ACRBP B细胞表位肽,经鉴定后符合后续主动免疫使用的要求。第二部分ACRBP B细胞表位肽免疫雌性小鼠及免疫反应验证目的:用所合成的小鼠ACRBP B细胞表位肽免疫雌性小鼠,并验证抗ACRBP抗体的存在及其特异性。方法:（1）免疫原及实验动物:实验组共四组,免疫原为匙孔血蓝蛋白分别偶联各ACRBP B细胞表位肽;阴性对照组一组,免疫原为匙孔血蓝蛋白;实验动物为8周龄Balb/c雌性小鼠,每组11只;（2）免疫方案:在0、2、3和5周对小鼠行皮下接种ACRBP B细胞表位肽疫苗,并依据免疫方案采集小鼠血清与阴道冲洗液;（3）酶联免疫吸附法:以牛血清白蛋白偶联各ACRBP B细胞表位肽为包被原,检测各组各时段血清或阴道冲洗液中抗ACRBP抗体水平;（4）蛋白质印迹法:以小鼠精子总蛋白中ACRBP为抗原,将每组小鼠末次免疫后的血清混合作为一抗,验证小鼠血清中抗ACRBP抗体的特异性。结果:（1）酶联免疫吸附法检测结果:主动免疫后,各实验组的全部小鼠血清中均存在抗ACRBP Ig G,且抗体水平随着免疫时间逐步上升,在初次免疫49d达到高峰,具有较高的滴度;主动免疫后,各实验组的全部小鼠阴道冲洗液中均存在抗ACRBP Ig G,但仅部分小鼠阴道冲洗液中存在抗ACRBP Ig A;（2）蛋白质印迹法结果:各实验组免疫后抗血清均能与小鼠精子总蛋白中60/55 k Da处的蛋白条带结合,符合ACRBP-W分子量;此外,P4组免疫后抗血清还能与小鼠精子总蛋白中约30 k Da处的蛋白条带结合,符合ACRBP-C的分子量。结论:4种ACRBP B细胞表位肽免疫雌性小鼠能成功诱导体液免疫,在血清和阴道冲洗液中存在特异性抗ACRBP抗体。第三部分小鼠ACRBP B细胞表位肽疫苗的避孕有效性评估目的:从体内和体外两方面,对小鼠ACRBP B细胞表位肽疫苗的避孕有效性进行评价。方法:（1）雌雄小鼠合笼实验:合笼后观察接种ACRBP B细胞表位肽小鼠的妊娠率与每窝产仔数;（2）小鼠精子活率检测:小鼠精子与抗ACRBP抗血清共孵育,伊红-苯胺黑染色法检测活率;（3）小鼠精子活力检测:小鼠精子与抗ACRBP抗血清共孵育,显微镜下检测活力;（4）小鼠精子形态学检测:小鼠精子与抗ACRBP抗血清共孵育,苏木精-伊红染色,显微镜下观察精子形态,计算畸形率;（5）小鼠精子顶体反应检测:小鼠精子与抗ACRBP抗血清共孵育,钙离子载体A23187同时用于顶体反应的诱导,考马斯亮兰G-250染色法检测顶体反应率;（6）小鼠人工体外受精:在含抗ACRBP抗血清的培养液中进行人工体外受精,受精24 h后统计2-细胞期胚胎数,计算体外受精率;（7）小鼠胚胎体外培养:置2-细胞期胚胎于含抗ACRBP抗血清的培养液中继续培养,受精96 h后统计囊胚数,计算囊胚形成率。结果:（1）妊娠率:接种ACRBP-P4的小鼠与对照组对比,妊娠率显著下降（36.36%（4/11）vs 90.91%（10/11）,P＜0.05）,而P1组、P2组和P3组的妊娠率呈下降趋势（72.73%（8/11）、45.45%（5/11）和45.45%（5/11））,但无统计学差异;（2）平均每窝产仔数:接种ACRBP B细胞表位肽小鼠的平均每窝产仔数无明显改变;（3）精子活率:各组抗ACRBP抗血清对小鼠精子活率没有显著改变;（4）精子活力:1:100、1:500和1:1000三种稀释度的抗ACRBP-P4抗血清均能显著抑制小鼠精子活力,前向运动型精子比例下降,而非前向运动型或静止型精子比例上升（P＜0.05）;（5）精子畸形率:各组抗ACRBP抗血清对小鼠精子形态没有显著改变;（6）顶体反应率:1:100稀释度的抗ACRBP-P4抗血清能显著抑制小鼠精子顶体反应,与对照组相比,顶体反应率显著下降（58.50%vs 69.00%,P＜0.05）;（7）体外受精率:1:100稀释度的抗ACRBP-P4抗血清能显著抑制体外受精,与对照组相比,体外受精率率显著下降（58.50%（117/200）vs 70.50%（141/200）,P＜0.05）;（8）囊胚形成率:各组抗ACRBP抗血清对囊胚形成无明显影响。结论:小鼠ACRBP-P4疫苗在体内和体外两方面均具有一定的避孕有效性。第四部分小鼠ACRBP B细胞表位肽疫苗的安全性和可逆性评估目的:对小鼠ACRBP B细胞表位肽疫苗的安全性和可逆性进行评价。方法:（1）小鼠宏观观察:观察接种小鼠ACRBP B细胞表位肽后小鼠体征、外观、行为和体重;（2）组织学检查:取接种小鼠ACRBP B细胞表位肽小鼠的心、肝、脾、肺、肾、子宫和卵巢,制作石蜡切片,进行苏木精-伊红染色,观察组织学结构;（3）酶联免疫吸附法:以牛血清白蛋白偶联各ACRBP B细胞表位肽为包被原,以小鼠血清或阴道冲洗液为一抗,定期监测初次免疫17周后小鼠的血清和阴道冲洗液中抗ACRBP抗体水平。结果:（1）除对照组与各实验组中均有部分小鼠出现局部皮肤溃疡和局部皮下肿胀外,接种ACRBP B细胞表位肽小鼠的体征、外观、行为和体重无其他明显改变;（2）接种ACRBP B细胞表位肽小鼠的心、肝、脾、肺、肾、子宫和卵巢的组织学结构无明显改变;（3）ACRBP B细胞表位肽初次免疫17周后,各实验组小鼠血清中的Ig G水平以及阴道冲洗液中的Ig G和Ig A水平基本都呈下降趋势。结论:小鼠ACRBP B细胞表位肽疫苗具有一定的安全性和可逆性。