【摘 要】
：
目的:基于模拟PBC患者的HiBEC凋亡模型,证实补虚化瘀法组方中药基于AKT/Bax信号通路抑制HiBEC凋亡的作用机制,并对补虚化瘀法组方中药调控HiBEC凋亡模型的miRNA150-5P表达的靶点进行初步探索。方法:（1）基于前期的研究发现GCDC参与了原发性胆汁性胆管炎（PBC）发病的基础上,本实验将以HiBEC为载体,并用1.2mM/LGCDC（甘氨鹅脱氧胆酸）为诱导剂,建立模拟PBC患
【基金项目】
：
国家自然科学基金《补虚化瘀法全方及有效组分调控miRNA223抑制胆管上皮细胞凋亡在PBC治疗中的机制研究》；
论文部分内容阅读
目的:基于模拟PBC患者的HiBEC凋亡模型,证实补虚化瘀法组方中药基于AKT/Bax信号通路抑制HiBEC凋亡的作用机制,并对补虚化瘀法组方中药调控HiBEC凋亡模型的miRNA150-5P表达的靶点进行初步探索。方法:（1）基于前期的研究发现GCDC参与了原发性胆汁性胆管炎（PBC）发病的基础上,本实验将以HiBEC为载体,并用1.2mM/LGCDC（甘氨鹅脱氧胆酸）为诱导剂,建立模拟PBC患者的HiBEC凋亡模型（此模型miRNA150-5P呈上调表达）。并基于该模型来探索补虚化瘀法组方中药高、低剂量组以及UDCA联合中药高剂量组基于AKT/Bax信号通路抑制HiBEC凋亡的作用机制,设置空白组、模型组、UDCA药物对照组。同时基于上述模型来初步探索补虚化瘀法组方中药高、低剂量组以及UDCA联合中药高剂量调控miRNA150-5P的靶点,设置空白组、模型组、UDCA药物对照组。结果:（1）.模型建立:1.GCDC对HiBEC的毒性研究:CCK-8显示0.5mM/L、1.0mM/L、1.2mM/L三种浓度的GCDC干预HiBEC 24h时对细胞不存在毒性作用;2.凋亡率:流式检测发现三种浓度均能引起HiBEC的凋亡,且在GCDC浓度为1.2mM/L时凋亡率最高为63.0±1.4（%）,与空白组比较具有统计学意义（p＜0.001）;3.凋亡通路研究:Western blot 法测定出 0.5mM/L、1.0mM/L、1.2mM/L三种浓度GCDC均能诱导磷酸化AKT的表达下调,以及Bax表达量上调,三组浓度与空白组相比较均具有统计学意义（p＜0.05）;4.miRNA:qRt-PCR结果显示,0.5mM/L、1.0mM/L、1.2mM/L 三组浓度的 GCDC 均上调 miRNA150-5P 的表达,此外三种浓度GCDC均能上调PBC相关miRNA21-3P及miRNA223-3P的表达,与空白组对比均具有统计学意义（P＜0.01）。（2）中药作用机制:1.凋亡率:流式检测显示各组对凋亡的抑制作用:UDCA联合中药高剂量组＞UDCA组＞中药高剂量=中药低剂量组＞模型组,且互相之间差异具有统计学意义（P＜0.001）,中药高、低剂量组之间差异不明显,不具有统计学差异（P＞0.05）。2.凋亡通路研究:Western blot实验显示对AKT活化作用:UDCA联合中药高剂量组=中药高剂量组＞中药低剂量＞UDCA组＞模型组,互相之间具有统计学意义（P＜0.001）;下调Bax蛋白表达作用:UDCA联合中药高剂量组＞中药高剂量=中药低剂量组＞UDCA组＞模型组,且互相之间具有统计学意义（P＜0.05）,中药高、低剂量组之间差异不明显,不具有统计学差异（P＞0.05）。3.miRNA:qRt-PCR结果显示各组对miRNA150-5P下调表达作用:UDCA联合中药高剂量组＞中药高剂量组=UDCA组＞中药低剂量组,与模型组对比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,中药高剂量组与UDCA组下调miRNA150-5P表达作用类似,不具有统计学意义（P＞0.05）;此外,UDCA组、中药高、低剂量及中药高剂量联合UDCA能下调miRNA21-3P及miRNA223-3P的表达;中药高剂量联合UDCA下调miRNA21-3P、miRNA223-3P效应,与UDCA组相类似,差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论:1.当GCDC浓度为1.2mM/L与HiBEC共培养24h时可以模拟PBC患者HiBEC凋亡模型,可以作为此次研究的细胞模型;2.GCDC可以上调HiBEC凋亡模型的miRNA150-5P的表达;3.中药高、低剂量组以及UDCA联合中药高剂量组均可下调HiBEC凋亡模型的凋亡率,与模型组对比均具有统计学意义（P＜0.001）,UDCA联合中药高剂量组效果优于单纯中药组和UDCA组;4.中药高、低剂量组以及UDCA联合中药高剂量组均可激活AKT的磷酸化,并下调Bax蛋白的表达量,与模型组对比均具有统计学意义（P＜0.001）,其中UDCA联合中药高剂量组作用效果最明显;5.中药对miRNA150-5P有下调作用,此种作用可能与AKT的磷酸化密切相关,有待进一步探索。
其他文献
目的本研究旨在“扶正治癌”观点指导下,丰富对“伏毒”循环肿瘤细胞的生物学特征的认识,基于金复康口服液中的主要有效物质,筛选有效的抗癌中药单体组合;探讨重楼皂苷Ⅶ与葫芦巴碱、麦冬皂苷D、黄芪甲苷Ⅳ、绞股蓝皂苷等不同比例组合抑制循环肿瘤细胞增殖的作用;探索重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌转移的作用机制。方法1.采用CCK-8细胞增殖实验,检测金复康中有效的中药单体,以重楼皂苷Ⅶ为主药,与不同比例的葫芦巴碱、麦冬皂苷
背景:扩张型心肌病（Dilated Cardiomyopathy,DCM）是导致心力衰竭的主要病因之一[1-2],属原发性混合型心肌病的一种,猝死率高,5年病死率为15%～50%[3]。其病因复杂多变,包括:病毒感染、免疫异常、基因突变、酒精中毒、围产期、抗肿瘤药物和代谢异常等。这些不同病因作用于心脏并导致心室扩张、心肌收缩和舒张受限的机理目前尚不清楚,目前缺乏针对性的治疗,治疗主要集中在抗心衰、
目的:明确补中益气汤（Buzhongyiqi decoction,BZYQD）是否可以通过SDF-1/CXCR4信号轴募集Treg细胞改善葡聚糖硫酸钠（Dextran.sulfate sodium.,DSS）诱导的结肠黏膜损伤。方法:雄性Sprague Dawley大鼠48只,均为SPF级,体重200±20g,随机分为以下六组:空白对照组（Control）,模型组（Model）,补中益气汤低剂量组
目的:探讨补肾降脂方通过PCSK9调控CD36、PPARγ-LXRα-ABCA1通路进而有效干预治疗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）的效应机制。方法:75只12周龄雄性ApoE-/-小鼠与25只同品系、同周龄雄性C57BL/6小鼠,适应性喂养一周后,ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为3组:ApoE-/-小鼠+高脂饲料喂饲组（模型组,n=25）,ApoE-/-
目的:明确慢性避水应激（WAS）引起的大鼠肠道菌群变化及疏肝饮（SGD）对其的调节作用。方法:雄性5周龄SD大鼠45只,体质量200±20g,购自斯莱克公司,饲养于上海中医药大学实验动物中心。动物分组如下:第一部分24只分为正常组、WAS组、抗生素组和抗生素+WAS组;第二部分21只分为正常组、WAS组和SGD组。采用WAS的方法复制IBS模型,造模期间记录排便量;造模结束后,测定结直肠球囊扩张（
目的:本研究旨在探讨益气活血化湿方及其拆方对氨基核苷嘌呤霉素（PAN）诱导的足细胞骨架蛋白损伤及自噬活性降低的保护与调节作用研究。方法:1.培养永生化小鼠足细胞系（MPC-5）作为细胞实验对象,光镜下观察足细胞分化形态,采用免疫荧光技术鉴定足细胞分化成熟标志蛋白Synaptopodin表达量,流式细胞仪定量分析Synaptopodin纯度;2.通过细胞增殖实验检测不同浓度PAN对细胞存活率的影响、
目的观察通络散结凝胶外用对骨癌痛大鼠的治疗作用,探讨通络散结凝胶治疗骨癌痛的分子机制。方法1.通络散结凝胶制备及质量控制。将通络散结处方饮片制备为凝胶,通过高效液相色谱法分析处方的主要成分以控制药物质量。2.骨癌痛大鼠行为学检测。将160g-180g Wistar大鼠分为安慰剂组、治疗组和假手术组。安慰剂组和治疗组大鼠注射Walker-256乳腺癌细胞,假手术组注射PBS。在造模前和造模后第5、1
目的基于m TOR-ATG5介导细胞自噬研究降脂颗粒改善非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis,NASH）的药效机制。方法1.46只雄性C57BL/6J小鼠,按体重随机分为正常组（n=13）和模型组（n=33）,模型组采用高脂饮食喂饲,正常组给予正常饲料。22周后,正常和模型组各取3只小鼠,检测小鼠肝功能和肝组织病理,以确定NASH模型的成功建立。将造模成功的
目的:通过结肠癌细胞（HCT-116）建立DSS诱导的IBD的细胞炎症模型,使用临床经验方红萸饮对其进行干预,探讨红萸饮通过抑制IBD模型介导的IL-6/JAK2/STAT3通路发挥对炎症性肠病治疗作用的机制。方法:1.选取结肠癌细胞HCT-116,设立空白对照组和DSS造模组,通过ELISA法检测细胞上清炎症因子IL-6的含量,选取HCT-116细胞的最佳造模条件。2.将红萸饮药物旋转、蒸发、冻
目的:导师领导的研究团队前期利用临床研究分析了单纯性肥胖患者,针灸埋线治疗前后的血清当中的蛋白组学改变。发现治疗后有50多种蛋白表达发生变化,进一步扩大样本应用PRM质谱定量蛋白分析,验证后得到6个蛋白。为了深入研究验证差异蛋白变化结果,阐明针灸埋线治疗机制,我们利用模型动物来分析研究差异蛋白变化,为针灸埋线干预单纯性肥胖在临床上的推广及应用提供更好的证据。方法:1、雄性C57b1/6小鼠,8周龄