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目的:研究艾灸对溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）大鼠肠黏膜屏障保护作用,并结合长链非编码RNA-信使RNA（lnc RNA-m RNA）网络探讨艾灸对UC肠黏膜屏障保护的免疫调节机制,以期为艾灸治疗UC的临床应用提供实验资料和科学依据。方法:第一部分不同灸法对正常和UC大鼠肠黏膜屏障的保护作用将体重180±20g的雄性清洁级SD大鼠随机分为正常组,正常+隔药灸组,正常+温和灸组,模型组,模型+隔药灸组,模型+温和灸组。采用4%DSS诱导UC大鼠模型。隔药灸组和温和灸组均取“天枢穴”（双）进行艾灸干预,隔药灸组每天灸1次,每穴2壮,连续7天;温和灸组每日灸1次,每次每穴灸10 min,连续7天。采用结肠组织宏观损伤评分、结肠组织病理学变化及评分,观察不同灸法对UC大鼠结肠黏膜损伤的效应;免疫印迹法检测各组大鼠结肠组织occludin、claudin、ZO-1蛋白的表达,免疫组化法检测各组大鼠结肠组织MUC2、JAM1、TGF-β1蛋白的定位及定量。第二部分隔药灸对UC大鼠结肠黏膜免疫与lnc RNA-m RNA网络的影响将体重180±20g的雄性清洁级SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和西药组,模型制备及隔药灸干预同前,西药组用柳氮磺胺吡啶溶液灌胃,每天2次,连续7天。采用HE染色法观察各组大鼠结肠组织病理学变化,采用RT-q PCR法和免疫印迹法分别检测各组大鼠结肠组织转录因子STAT3、NF-κB p65磷酸化蛋白表达,以及炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β的m RNA和蛋白表达;采用RNA-seq高通量测序技术检测lnc RNA与m RNA的表达谱,运用生物信息学技术分析和比较艾灸对lnc RNA-m RNA互作网络的调控作用。以RT-q PCR法扩大样本量验证高通量测序结果中lnc RNA与其靶基因m RNA均有显著差异者;筛选lnc RNA LOC108352929及其靶基因,结合体外实验,在大鼠肠神经胶质细胞（EGCs）中检测LOC108352929与靶基因Phf11的基础表达,构建Smart Sliencer干扰RNA并转染EGCs,敲低LOC108352929后观察EGCs中Phf11、TNF-α、IL-1β的表达。结果:第一部分不同灸法对正常和UC大鼠肠黏膜屏障的保护作用1.结肠宏观损伤评分:与正常组比较,模型组大鼠结肠损伤评分显著升高（P＜0.01）,正常+隔药灸组、正常+温和灸组则无显著变化（P＞0.05）。与模型组比较,模型+隔药灸组、模型+温和灸组大鼠结肠肉眼损伤评分均降低（P＜0.05）。2.结肠组织病理学观察及评分:正常组、正常+隔药灸组以及正常+温和灸组结肠腺体排列良好,黏膜完整,未见充血、水肿及炎性细胞浸润;模型组结肠组织表面溃疡,结肠上皮缺损,腺体排列不规则,大量的炎性细胞浸润;模型+隔药灸、模型+温和灸组结肠组织黏膜可见愈合性溃疡,肠上皮修复,腺体排列较紊乱,黏膜和黏膜下层有少量的炎性细胞浸润。与正常组比较,模型组结肠组织病理学评分显著升高（P＜0.01）,正常+隔药灸组、正常+温和灸组则无显著变化（P＞0.05）。与模型组比较,模型+隔药灸组、模型+温和灸组大鼠结肠组织病理学评分均降低（P＜0.05）。3.艾灸对UC大鼠结肠黏膜屏障的影响:与正常组比较,模型组结肠组织occludin、claudin、MUC2、JAM1、TGF-β1蛋白的表达均显著降低（P＜0.001）;与模型组比较,模型+温和灸组结肠组织occludin蛋白表达量显著升高（P＜0.01）,模型+隔药灸组、模型+温和灸组结肠组织MUC2、JAM1、TGF-β1的蛋白表达均显著升高（均P＜0.001）。第二部分隔药灸对UC大鼠结肠黏膜免疫与lnc RNA-m RNA网络的影响1.结肠组织病理学观察:病理学评分结果显示:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织病理学评分显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠组织病理学评分均显著降低（P＜0.05）。2.隔药灸对UC大鼠结肠黏膜免疫调节作用:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织TNF-α、IFN-γ蛋白及m RNA的表达均显著升高（P＜0.05）,IL-1β蛋白的表达也显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠组织TNF-α蛋白及m RNA（P＜0.05）、IFN-γ蛋白（P＜0.05）的表达均显著降低,隔药灸组大鼠结肠组织IL-1β蛋白的表达也显著降低（P＜0.05）。与正常组比较,模型组大鼠结肠组织p-STAT3、p-NF-κB p65蛋白的表达均显著升高（P＜0.05）,NF-κB p65 m RNA的表达降低（P＜0.05）;与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠组织p-STAT3、p NF-κBp65蛋白的表达均显著降低（均P＜0.05）。3.隔药灸对UC大鼠结肠组织lnc RNA与m RNA表达谱的影响:lnc RNA表达谱显示:模型组结肠组织较正常组15个上调,5个下调;隔药灸组结肠组织较模型组有6个上调,9个下调;西药组结肠组织较模型组有13个上调,18个下调。m RNA表达谱显示:模型组结肠组织较正常组有102个差异表达基因,其中64个上调,38个下调。与模型组比较,隔药灸组结肠组织有157个差异表达基因,其中有117个上调,40个下调;西药组结肠组织有272个显著差异表达基因,其中有176个上调,96个下调。KEGG通路分析提示:模型组与正常组的差异表达基因涉及的通路主要包括AMPK信号通路、抗原加工提呈、补体系统、PPAR信号通路等;隔药灸组与模型组的差异表达基因涉及的通路主要包括补体系统、吞噬体、抗原加工提呈、细胞黏附分子等;西药组与模型组的差异表达基因涉及的通路主要包括PPAR信号通路、p53信号通路、T细胞受体信号通路等。4.差异表达的lnc RNAs与m RNAs验证:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织LOC108352929基因表达显著降低（P＜0.001）,Phf11与RT1-N3表达均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠组织LOC108352929表达均显著升高（P＜0.05）,隔药灸组大鼠结肠组织Phf11与RT1-N3表达显著降低（P＜0.05）。5.敲低EGCs中LOC108352929对Phf11、TNF-α、IL-1β表达的影响:以Smart Sliencer转染EGCs,与NC组比较,lnc RNA LOC108352929的转录水平显著下降（P＜0.05）,沉默效率达到30%左右;EGCs中Phf11、IL-1β的m RNA表达无显著差异（P＞0.05）;EGCs中TNF-α的m RNA表达显著上升（P＜0.01）。结论:1.生理状态下,不同灸法不影响大鼠结肠组织形态及肠黏膜机械屏障功能;病理状态下,隔药灸与温和灸均可纠正UC大鼠结肠黏膜组织形态学变化,能保护肠黏膜机械屏障。2.隔药灸能通过抑制转录因子STAT3与NF-κB p65的磷酸化,降低促炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的蛋白表达,可能是艾灸保护UC大鼠结肠黏膜屏障功能的免疫调节机制之一。3.艾灸能影响UC大鼠结肠组织lnc RNA与m RNA表达谱,涉及的主要通路与肠黏膜免疫相关;艾灸能升高结肠组织LOC108352929的lnc RNA表达水平,降低Phf11、RT1-N3的m RNA表达水平,可能是艾灸保护UC结肠黏膜屏障机制之一。4.体外实验明确了敲低EGCs中LOC108352929的lnc RNA表达,TNF-α的m RNA表达显著增加,或是UC结肠黏膜损伤的关键环节;艾灸的抗炎免疫作用,可能是通过lnc RNA LOC108352929发挥抑制UC大鼠结肠TNF-α表达作用的。