【摘 要】
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[目 的]1.明确干扰素刺激基因15（Interferon-stimulated gene 15,ISG15）对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭的作用。2.明确自噬是否能够影响ISG15对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的调控。[方法]1.通过qRT-PCR检测骨肉瘤细胞系143B、U20S、HOS、MG63与正常成骨细胞hFOB中ISG15 mRNA的表达水平差异。2.使用干扰慢病毒载体和过表达
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81760520）,ISG15通过调控lncRNARP11-5407.3介导细胞自噬影响骨肉瘤侵袭及转移的机制研究；
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[目 的]1.明确干扰素刺激基因15（Interferon-stimulated gene 15,ISG15）对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭的作用。2.明确自噬是否能够影响ISG15对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的调控。[方法]1.通过qRT-PCR检测骨肉瘤细胞系143B、U20S、HOS、MG63与正常成骨细胞hFOB中ISG15 mRNA的表达水平差异。2.使用干扰慢病毒载体和过表达慢病毒载体转染骨肉瘤细胞系143B和U20S,通过qRT-PCR和Western blotting方法检测ISG15的表达水平变化。3.通过细胞克隆形成实验和CCK8实验检测骨肉瘤细胞系143B和U20S的增殖能力,通过划痕实验和Transwell迁移/侵袭实验检测骨肉瘤细胞系143B和U20S的迁移及侵袭能力。4.利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）改变过表达ISG15的骨肉瘤细胞系143B和U2OS的自噬水平,检测是否可以逆转ISG15对143B和U2OS细胞增殖、迁移及侵袭的作用。[结 果]1.qRT-PCR结果显示143B和U2OS细胞中ISG15 mRNA的表达水平低于正常成骨细胞hFOB,MG63细胞中ISG15 mRNA的表达水平高于正常成骨细胞hFOB,HOS细胞中ISG15 mRNA的表达水平与hFOB细胞无明显统计学差异。2.与转染慢病毒空载体的143B和U2OS细胞相比,转染干扰慢病毒载体的143B和U2OS细胞中ISG15 mRNA和ISG15蛋白质表达水平降低,转染过表达慢病毒载体的143B和U2OS细胞中ISG15 mRNA和ISG15蛋白质表达水平升高。3.细胞克隆形成实验结果显示,敲低ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞克隆数减少,过表达ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞克隆数增加;CCK8实验结果显示,敲低ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞在波长为450nm处的OD值降低,过表达ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞在波长为450nm处的OD值升高;划痕实验结果显示,敲低ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞的迁移速率减慢,过表达ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞的迁移速率增快;Transwell迁移/侵袭实验结果显示,敲低ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞的穿膜细胞数减少,过表达ISG15的表达水平,143B和U2OS细胞的穿膜细胞数增多。4.加入自噬抑制剂3-MA后,细胞克隆形成实验结果显示,过表达ISG15的143B和U2OS细胞克隆数减少;CCK8实验结果显示,过表达ISG15的143B和U2OS细胞在波长为450nm处的OD值降低;划痕实验结果显示,过表达ISG15的143B和U2OS细胞的迁移速率减慢;Transwell迁移/侵袭实验结果显示,过表达ISG15的143B和U2OS细胞的穿膜细胞数减少。[结 论]1.上调ISG15的表达水平对骨肉瘤细胞的增殖、迁移及侵袭具有促进作用,而下调ISG15的表达水平对骨肉瘤细胞的增殖、迁移及侵袭具有抑制作用,提示ISG15可能在骨肉瘤的发生发展中发挥促癌基因的作用,并且与骨肉瘤的转移密切相关。2.自噬抑制剂3-MA能够逆转过表达ISG15对骨肉瘤细胞的促增殖、迁移及侵袭能力,提示ISG15对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的促进作用可能与细胞自噬过程有关。
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