【摘 要】
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虎奶菇疏水蛋白是一种分泌的非催化真菌蛋白,作用于界面,可以自组装形成虎奶菇子实体上的“雨衣”。这种特性使疏水蛋白在虎奶菇的生长发育过程中发挥出重要作用。并且虎奶菇疏水蛋白具有很好的泡沫稳定性和乳化性,因此在食品工业有巨大的商业应用潜质。但是产量太低影响了虎奶菇疏水蛋白的大规模商业。因此本研究旨在通过培养优化及疏水蛋白基因过表达两方面的研究提高虎奶菇疏水蛋白产量。主要研究结果如下:（1）液体培养虎奶
【基金项目】
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国家自然科学基金（31772375）；
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虎奶菇疏水蛋白是一种分泌的非催化真菌蛋白,作用于界面,可以自组装形成虎奶菇子实体上的“雨衣”。这种特性使疏水蛋白在虎奶菇的生长发育过程中发挥出重要作用。并且虎奶菇疏水蛋白具有很好的泡沫稳定性和乳化性,因此在食品工业有巨大的商业应用潜质。但是产量太低影响了虎奶菇疏水蛋白的大规模商业。因此本研究旨在通过培养优化及疏水蛋白基因过表达两方面的研究提高虎奶菇疏水蛋白产量。主要研究结果如下:（1）液体培养虎奶菇菌丝产疏水蛋白条件优化通过正交试验可以得到虎奶菇液体发酵产疏水蛋白最佳培养基为玉米粉20 g/L,酵母粉5 g/L,硫酸镁1 g/L,磷酸二氢钾1 g/L。以此方式制备发酵培养基,在温度为32°C,转速120 r/min的摇床中培养8 d。此培养条件下,虎奶菇干菌丝产量可达11g/L,而疏水蛋白产量约为48 mg/L。（2）疏水蛋白基因Vmh3克隆及生物信息分析虎奶菇疏水蛋白基因Vmh3,其CDS序列全长327 bp,编码108个氨基酸,分子量约为13 k Da,理论等电点为6.11。Vmh3基因DNA序列全长452 bp。它包含3个外显子（1-242,242 bp;296-333,39 bp;406-452,47 bp）和两个内含子（243-295,53 bp;334-405,72 bp）。疏水蛋白Vmh3无跨膜螺旋区,含有信号肽的可能性极高,推测其为分泌的胞外蛋白。又因为发酵液中仅可以提取极少量的疏水蛋白,所以推测Vmh3是一个位于细胞壁上的蛋白。（3）疏水蛋白过表达转化子的培育成功构建过表达载体,根癌农杆菌转化获得转化子进行荧光显微镜镜检和Southern blot验证,得到三株稳定遗传的过表达转化子。其中两株长势较好的转化子进行荧光定量PCR分析得知转化子基因表达量比起野生型有明显提升,最好的一株疏水蛋白基因相对表达量达到了野生型的6倍。用基因表达量最高的转化子液体培养并提取疏水蛋白发现其产量约为野生型的1.6倍。
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