论文部分内容阅读
目的:为探究γδ T细胞及其亚群在IgG4相关性疾病（IgG4-related disease IgG4-RD）中的表型及作用,尤其是对B细胞向浆母细胞分化以及免疫球蛋白表达的影响。方法:流式细胞术检测外周血γδT细胞及其亚群比例、趋化因子受体、IL-21受体、胞内细胞因子、以及转录因子蛋白表达水平。免疫荧光染色检测Vδ2 T细胞在受累中的表达以及与B细胞和趋化因子受体的共定位情况。Transwell实验检测细胞对趋化因子的迁移率。使用IPP预扩增后的外周血Vδ2 T细胞与B细胞共培养或其上清培养B细胞,流式细胞术检测B细胞亚群比例以及ELISA检测培养上清中免疫球蛋白的表达水平。用IL-21对健康人（healthy control,HC）外周血γδT细胞进行刺激,检测pSTAT3、Blimp-1、GATA3等下游分子的表达变化,同时加入JAK抑制剂（巴瑞替尼或托法替尼）或STAT3抑制剂,检测对该通路和γδ T细胞表型的影响。此外,qRT-PCR检测促纤维化相关基因的表达。结果:病情活动IgG4-RD患者外周血γδ T细胞尤其是Vδ2 T细胞比例较HC下降,但高表达 Th2 型细胞因子（包括 IL-4,IL-5,IL-9,IL-13 等）、IL-21R、GATA3、Blimp-1、以及CCR7。但Th1型细胞因子、CXCR5、ICOS、CD40L,以及转录因子TBX21、FOXP3、RORC、BCL6表达水平与HC相比无显著差异或升高。Vδ2T细胞在IgG4-RD患者颌下腺受累组织中高表达,并与B细胞及CCR7/CCL21存在共定位。IgG4-RD患者外周血Vδ2T细胞对CCL21的迁移率高于HC。扩增后的Vδ2T细胞及其上清促进B细胞向浆母细胞分化以及免疫球蛋白IgG4、IgG、T-IgE表达。IgG4-RD患者Vδ2 T细胞较HC高表达pSTAT3（pY705）、Blimp-1、以及GATA3,三者互为正相关;加入IL-4刺激后,患者Vδ2T细胞表达GATA3进一步升高。IL-21可以促进HC的γδT细胞中pSTAT3（pY705）、Blimp-1、以及GATA3表达,而JAK抑制剂（巴瑞替尼和托法替尼）以及STAT3抑制剂（S3I-201）对其具有抑制作用。此外,IgG4-RD患者外周血γδT细胞及其亚群较HC还高表达TGF-β,以及COL1A1,COL1A2,COL3A1,ACTA2等促纤维化相关基因。结论:IgG4-RD患者外周血Vδ2T细胞在IL-21高表达的微环境刺激下,通过IL-21-STAT3-Blimp-1-GATA3通路获得较HC突出的Th2样表型,并发挥促进浆母细胞分化和免疫球蛋白表达的功能。CCR7的高表达可能是其趋化至受累组织与B细胞相互作用的原因。JAK或STAT3抑制剂包括IL-21单抗能够抑制IL-21-pSTAT3通路介导的Th2样功能表型,是治疗IgG4-RD潜在的靶点。目的:基于多种基线临床、实验室数据以及B细胞免疫表型探索IgG4相关性疾病（IgG4-RD）异质性。方法:纳入154例IgG4-RD患者的22种基线变量,根据主成分分析（PCA）和聚类分析对IgG4-RD患者进行临床亚群分组;并通过主成分评价计算每例患者得综合评分（IgG4-RD composite score,IgG4-RDCS）。采用多元线性回归建立“IgG4-RDCS”预测模型。为了评价IgG4-RD CS评估疾病活动性的效力,分别根据IgG4-RD CS和IgG4-RD反应指数（IgG4-RD RI）对患者进行分组和比较。流式细胞术检测B细胞亚群,获取病情活动期IgG4-RD患者（n=105）外周血4种B细胞亚群,首先初步分析B细胞亚群的异质性谱,然后获取活动期IgG4-RD患者（n=49）、缓解期IgG4-RD患者（n=49）以及健康对照（n=47）10种B细胞亚群,应用主成分分析（PCA）及聚类分析对患者进行B细胞免疫表型鉴定及分组。结果:临床表型异质性方面,PCA结果提示IgG4-RD患者的22中基线变量主要可以分为高炎性、高血清IgG4,多器官受累,以及过敏相关的临床表型;聚类分析将患者分为三组临床亚型:cluster 1,高炎性和高免疫球蛋白组;cluster 2,内脏器官受累组;cluster 3,低炎性和低免疫球蛋白以及浅表器官受累组。分别基于IgG4-RD CS和IgG4-RD RI对患者进行分组,不同组间患者均存在血清学和临床特征的显著差异。IgG4-RD CS评估疾病严重程度的能力与RI相似。“IgG4-RD CS”预测模型纳入了四个独立变量,包括:淋巴细胞计数,嗜酸性粒细胞计数,IgG水平,以及器官受累总数。B细胞表型异质性方面,基于4种B细胞亚群,聚类分析将105例活动期IgG4-RD患者分为两种内表型:高比例Breg及高比例初始B细胞组（n=48）,和高比例浆母细胞及高比例记忆B细胞组（n=57）。PCA结果显示活动期IgG4-RD患者的B细胞表型存在“浆母细胞-初始B细胞”以及“记忆B细胞-Breg”两个轴的异常。初始B细胞比例与疾病活动性负相关。浆母细胞及记忆B细胞与血清学标志物均正相关。基于10种B细胞亚群,聚类分析将活动期IgG4-RD患者分为3组,组1:记忆B细胞比例低,Breg比例接近正常;组2:记忆B细胞比例高,Breg比例低;组3:浆母细胞比例高,初始B细胞比例低。其中,组2和组3患者更有可能成为难治性患者。结论:病情活动期IgG4-RD可以分为三种临床亚群,IgG4-RD CS有可能成为RI评分的补充,有助于全面评估疾病严重程度。此外,基于B细胞异质性,活动期IgG4-RD患者可以分为3组。B细胞免疫表型有助于阐明IgG4-RD发病机制,发现潜在的难治性IgG4-RD患者,为新的治疗方向提供重要线索。