【摘 要】
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第一部分，目的：探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对人肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活化作用。 方法：采用原代培养的HPMEC，以浓度为10、10、10、10mol/L的Ang Ⅱ刺激
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第一部分，目的：探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对人肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活化作用。
方法：采用原代培养的HPMEC，以浓度为10<-8>、10<-7>、10<-6>、10<-5>mol/L的Ang Ⅱ刺激细胞0、0.5、1、2、4小时，提取核蛋白，用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)观察各时间点NF-κB对DNA的结合活力。
结果：Ang Ⅱ能活化HPMEC中的NF-κB。Ang Ⅱ 10<-8>mol/L组在4h表现出明显的NF-κB活化作用(与0h比较，p<0.05)；AngⅡ 10<-7>mol/L组在1h开始活化NF-κB(与0h比较，p<0.05)，随后NF-κB活化效应逐渐增强；Ang Ⅱ 10<-6>mol/L组NF-κB活性变化的时间依赖关系最为明显，在1h开始活化NF-κB(与0h比较，p<0.05)，2h时达到高峰(与1h比较，p<0.05)，4h时活化水平已下降(与2h比较，p<0.05)；Ang Ⅱ 10<-5>mol/L组在0.5h即明显活化NF-κB(与0h比较，p<0.05)，随后各时间点NF-κB活化效应逐渐减弱。
结论：Ang Ⅱ刺激HPMEC后能引起NF-κB结合力增加，这可能是Ang Ⅱ促炎作用的重要环节。
第二部分，目的：探讨Ang Ⅱ-AT1-P13K信号转导通路在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的人肺微血管内皮细胞(HPMEC)损伤作用中的作用。
方法：①以浓度为10<-6>mol/L的Ang Ⅱ刺激原代培养的HPMEC，western blot检测0、2、5、10、20min时Akt的磷酸化水平，DAPI染色荧光显微镜下观察并计数0、6、12、18、24h时凋亡细胞百分比；②分别以10<-6>mol/LLosartan(AT1阻断剂)和10<-4>mol/L Ly294002(P13K抑制剂)预处理HPMEC 1h后，再以相同浓度Ang Ⅱ刺激，检测Akt磷酸化水平、NF-κB对DNA的结合力和凋亡细胞百分比。
结果：Ang κ 10<-6> mol/L刺激HPMEC后2min，Akt即明显磷酸化(与0min比较，p<0.05)，此后磷酸化水平逐渐下降，但直至20min该效应仍明显高于0min组(与0min比较，p<0.05)，Ang Ⅱ刺激后12h细胞凋亡百分比开始增加(与0h比较，p<0.05)，24h时凋亡效应最明显(与18h比较，p<0.05)；Losartan阻断AT1后，再以Ang Ⅱ刺激，2min时Akt磷酸化、2h时NF-κB活性增加和24h细胞凋亡效应均受明显抑制(与各对照组比较，p<0.05)：应用Ly294002阻断PI3K后，再以Ang Ⅱ刺激，Akt磷酸化水平降低至正常(与2min比较，p<0.05)，NF-κB活性也被部分抑制(与2h比较，p<0.05：与0h比较，p<0.05)，而24h细胞凋亡百分比保持不变。
结论：Ang Ⅱ刺激HPMEC后通过AT1引起Akt磷酸化、NF-κB活化和细胞凋亡等效应；PI3K参与TAkt磷酸化和NF-κB活化，但在Ang Ⅱ促进细胞凋亡中未起主导作用。
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