【摘 要】
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目的:以大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为肾间质纤维化模型,观察中介素(Intermedin IMD)对UUO大鼠模型间质血管生成的影响。方法:(1)实验分组与造模:雄性Wistar大鼠72只,随机分为假
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目的:以大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为肾间质纤维化模型,观察中介素(Intermedin IMD)对UUO大鼠模型间质血管生成的影响。方法:(1)实验分组与造模:雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组(Sham组,n=24,行左输尿管分离术)、模型组(UUO,n=24)和IMD组(n=24),后2组行左输尿管结扎术。IMD组:在无菌条件下,将IMD8-47溶于200ul生理盐水后注入微量渗透泵,于大鼠背脊部皮下作一长约1cm横切口,将泵植入,泵开口朝向鼠背前方,持续皮下给药,剂量为100ng/(kg·h),确保泵在皮下活动度好。各组大鼠分别于术后7d、14d、2ld和28d随机选取6只,腹主动脉采血并留取梗阻侧肾组织,之后处死。(2)常规测定血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和胱抑素C(Cys C)含量。(3)HE和PAS染色评估肾小管间质损伤程度。(4)免疫组化法检测血小板内皮细胞粘附分子(CD31或PECAM-1)、CD34、氨肽酶P(Aminopeptidase P,APP或JG-l2)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体-2(VEGFR2)和血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)表达;(5)实时定量PCR(Real Time-PCR)法检测肾组织VEGF、VEGFR2和VE-cadherin m RNA表达。结果:(1)血生化改变:与Sham组相比,不同时间点UUO组大鼠血清BUN、Scr和Cys C均升高(P<0.05),在梗阻21d达高峰,之后降低;与UUO组相比,IMD组血清BUN、Scr和Cys C均降低(P<0.05)。(2)肾脏组织学改变:光镜下显示,Sham组大鼠肾脏组织结构清晰,肾小球结构基本正常,肾小管上皮细胞完整,排列整齐。UUO组术后7d,间质大量炎症细胞浸润,部分肾小管空泡变性;术后14d,炎症细胞浸润及细胞增殖明显,成纤维细胞增生,部分小管结构不完整,小管扩张呈囊状,皮质变薄;术后21d,小管结构消失,大量炎症细胞浸润及细胞增殖,间质纤维化;术后28d,炎症细胞浸润有所减少,扩张小管数量增多,部分小管萎缩消失,间质纤维化明显。PAS染色见肾小管基底膜弥漫性增厚,皱缩增多,系膜区增宽。与UUO组相比,IMD组炎细胞浸润、肾小管损伤和纤维化程度较轻。肾小管间质损伤评分:与Sham组相比,不同时间点UUO组大鼠损伤程度均升高(P<0.05);与UUO组相比,IMD组损伤程度在21d、28d明显减轻(P<0.05)。(3)肾脏微血管标记物变化:与Sham组相比,不同时间点UUO组CD31、CD34、JG-12阳性表达均降低(P<0.05);与UUO组相比,IMD组三者阳性表达均增多(P<0.05)。(4)VEGF、VEGFR2 m RNA和蛋白的表达:与Sham组相比,不同时间点UUO组VEGF、VEGFR2 m RNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与UUO组相比,IMD组二者m RNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。(5)VE-cadherin m RNA和蛋白的表达:与Sham组相比,UUO组VE-cadherin m RNA由低于Sham组逐渐升高到超越Sham组,并在21d达到高峰,之后降低;不同时间点VE-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。与UUO组相比,IMD组VE-cadherin m RNA表达量有增多趋势;VE-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)结论:IMD可保护肾脏血管损伤,增加微血管密度(Microvessel Density,MVD),其作用机制主要通过增加VEGF-VEGFR2通路表达,促进肾组织血管生成,并增加该通路与VE-cadherin的相互作用,对维持血管完整性起一定作用,从而起到改善肾功能,延缓肾脏纤维化。
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