目的:肺癌的发病率和致死率在全球范围内均位居前列,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）占比约85%。目前的肿瘤临床实践指南推荐表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI）作为EGFR敏感突变阳性NSCLC患者的一线治疗药物,其中奥希替尼（osimertinib,Osi）作为第三代EGFR-TKI是一线首选治疗药。虽然奥希替尼给患者带来了显著的临床获益,但是获得性耐药仍然不可避免。奥希替尼的获得性耐药主要体现在旁路激活,即EGFR以外的酪氨酸激酶受体基因突变或扩增。双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）具有很好的抗肿瘤作用,高通量蛋白芯片显示双氢青蒿素可以作用于多个酪氨酸激酶靶点,协同EGFR-TKI抑制NSCLC细胞的生长。本论文在此基础上,围绕双氢青蒿素缓解非小细胞肺癌对奥希替尼耐药的药效及其作用机制展开研究。方法:选择非小细胞肺癌奥希替尼敏感细胞株和耐药细胞株为工具细胞,通过Western blotting、qPCR等技术对比敏感细胞株与耐药细胞株内的铁死亡相关蛋白水平,细胞增殖实验对比敏感细胞株和耐药细胞株对铁死亡诱导剂RSL3的敏感差异,以及Osi短时干预后铁死亡相关蛋白的变化,验证Osi耐药性与铁死亡拮抗相关。通过CCK-8细胞增殖实验评估DHA和Osi的联合抑制作用,流式细胞术分析DHA和Osi单独或联合给药后对耐药细胞周期和凋亡的影响,通过以上实验评估DHA和Osi的协同抑制效应。通过CCK-8细胞增殖实验检测不同抑制剂（铁死亡抑制、自噬抑制剂、凋亡抑制剂、坏死抑制剂等）对DHA抑制活性的影响,推测DHA诱导细胞死亡方式。进一步采用透射电镜观察线粒体,免疫荧光检测铁含量,流式细胞术分析活性氧（reactive oxygen species,ROS）,丙二醛（MDA）、GSH试剂盒检测脂质氧化产物水平,Western blotting检测铁死亡相关蛋白等方法分析DHA单独或联合Osi触发铁死亡作用,以及ROS清除剂、铁螯合剂、铁死亡抑制剂对DHA触发铁死亡的逆转作用,通过以上实验验证DHA主要通过诱导ROS触发细胞铁死亡来逆转Osi的铁死亡拮抗状态。最后体内实验验证双氢青蒿素联合奥希替尼给药对耐药移植瘤小鼠体内肿瘤的作用。结果:相比于敏感细胞株,奥希替尼耐药细胞株中谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁蛋白重链（FTH1）显著高表达,对铁死亡诱导剂RSL3更为敏感,耐药细胞用Osi干预后,可在24 h内诱导GPX4和FTH1的表达,说明在奥希替尼刺激下可诱导抗铁死亡蛋白的表达,奥希替尼耐药可能与铁死亡拮抗状态有关。体外细胞药效实验结果表明,双氢青蒿素可以显著增加耐药细胞对奥希替尼的敏感性,抑制细胞生长。机制研究证明,DHA可以上调细胞内活性氧水平,上调丙二醛,扰乱脂质氧化平衡,诱发细胞铁死亡作用,缓解奥希替尼耐药。进一步研究发现,双氢青蒿素缓解耐药可能与抑制奥希替尼诱导的铁死亡阴性调节蛋白FTH1的表达有关。体内动物药效结果显示,两药联合可以明显抑制非小细胞肺癌耐药移植瘤生长,肿瘤组织切片免疫组化显示联合给药可以抑制FTH1的表达,与细胞结果一致,且未见明显的肝肾毒性。结论:双氢青蒿素通过诱导ROS依赖性铁死亡作用,削弱耐药细胞铁死亡拮抗状态,增强奥希替尼对EGFR突变阳性非小细胞肺癌的抑制作用,从而达到缓解非小细胞肺癌对奥希替尼的获得性耐药。