烟碱样乙酰胆碱受体α7在哮喘患儿外周血CD4<'+>淋巴细胞上表达的研究

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目的:分析哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与相应的细胞培养液IL-4、IFN-γ水平的相关关系,探讨nAChRα7表达与Th1/Th2平衡的关系,进一步求证nAChRα7在哮喘发病过程中的临床意义。材料与方法:根据哮喘防治常规中的诊断标准,选择典型的发作期支气管哮喘患儿30例(男16例、女14例),健康对照20例(男11例、女9例)。取清晨空腹静脉血8ml,EDTA抗凝,分离淋巴细胞,把等量细胞(2×106)分别装入3个等容(3ml)的含1640培养皿中,并分别加入烟碱(100uM)、α-BTX(1ug/ml)、空白对照,于5%CO2、37℃培养箱恒温孵育,培养24小时后提取淋巴细胞,并收取培养液-20℃冻存,待测。用三色流式细胞仪检测淋巴细胞表达CD3、CD4、nAChRα7。用ELISA法检测淋巴细胞培养液中IFN-γ、IL-4的水平。结果:1.流式细胞检测:①健康儿童外周血CD4+T淋巴细胞可表达nAChRα7,哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7明显增高。(3.91±2.67%/2.90±1.01%,t=2.17,P<0.05)。②烟碱刺激后外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7较未刺激增加(健康对照组4.86±2.82%2.90±1.01%,t=3.03,P<0.01,哮喘组6.73±2.49%/3.91±2.67%,t=4.17,P<0.01);且烟碱刺激后哮喘组较正常组表达增加(6.73±2.49%/4.86±2.82%t=2.35,P<0.05)。③α-BTX刺激后外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7降低(健康对照组2.40±3.18%/2.90±1.01%,t=0.86,P>0.05,哮喘组3.23±3.65%/3.91±2.67%,t=1.01,P>0.05),无统计学意义。2.ELISA检测:①哮喘患儿培养液中IL-4水平较正常对照儿童增加(6.35±1.62/4.69±0.79 pg/ml,t=4.74,p<0.01),IFN-γ水平较正常对照儿童减低(2.04±0.94/2.84±1.17 pg/ml,t=2.50,p<0.05);②烟碱刺激后IL-4水平较未刺激增高(健康对照组5.87±1.12/4.69±0.79pg/ml,t=3.76,P<0.01、哮喘组7.64±1.51/6.35±1.62pg/ml,t=3.14,P<0.01),IFN-γ较未刺激减低(健康组1.91±0.72/2.84±1.17pg/ml,t=3.44,P<0.01、哮喘组1.44±0.64/2.04±0.94pg/ml,t=2.86,P<0.05);且哮喘组IL-4增加、IFN-γ降低更加明显。③α-BTX刺激后IL-4(健康对照组4.26±1.69/4.69±0.79pg/ml,t=1.05,P>0.05、哮喘组5.80±1.20/6.35±1.62pg/ml,t=1.27,P>0.05),IFN-γ,(健康对照组3.37±0.94/2.84±1.17pg/ml,t=1.36,P>0.05、哮喘组2.18±1.38/2.04±0.94pg/ml,t=0.45,P>0.05)。3.外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与培养液表达IL-4呈正相关关系(r=0.517,p<0.01)、与IFN-γ呈负相关关系(r=-0.288,p<0.05)。结论:1.哮喘患儿存在免疫失衡,外周血CD4+T淋巴细胞分泌IL-4增加,IFN-γ减低:2.哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面的nAChRα7表达增加,而且外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与淋巴细胞培养液IL-4水平呈正相关关系,与IFN-γ水平呈负相关关系。
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