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目的:BAP18是一种重要的雄激素受体的辅调节因子,可以上调AR介导的基因转录,已报道在前列腺癌的发生发展中起重要作用。但在非肿瘤性疾病,例如以高雄激素血症为主要病理特征的多囊卵巢综合征中,BAP18的功能需要进一步探究。本研究的目的是:1.明确BAP18在多囊卵巢综合征患者颗粒细胞中的表达情况及与疾病的关系;2.阐明BAP18是否通过影响雄激素受体介导的基因转录影响多囊卵巢综合征的发生发展;3.探究BAP18影响AR介导基因转录的机制;4.探究BAP18与AR本身表达之间的联系及原因;5.探索BAP18在颗粒细胞中发挥的生物学功能。研究方法:1.通过收集多囊卵巢综合征女性与正常非PCOS女性的颗粒细胞,探究两组中BAP18的表达量,及BAP18的表达与PCOS疾病病例指标之间的联系;2.利用蛋白免疫共沉淀实验(co-IP)明确在颗粒细胞中BAP18是否与AR相互作用,利用免疫荧光实验验证BAP18与AR在颗粒细胞中的定位,然后利用双荧光素酶报告基因实验验证BAP18对AR介导的基因转录活性的影响;3.试图深入探讨BAP18影响雄激素信号通路的分子机制。寻找BAP18在颗粒细胞中可能影响的雄激素受体下游靶基因,然后利用染色质免疫共沉淀实验(ChIP)验证BAP18的敲低对AR在AR靶基因转录活性区域的招募的变化和组蛋白修饰水平;4.利用蛋白免疫印迹(western blotting)和q-PCR实验验证BAP18是否可以上调AR本身的转录,再利用Ch IP实验验证BAP18是否招募到AR基因启动子区影响AR本身的转录,最后利用co-IP实验明确BAP18与影响AR本身转录激活的转录因子是否可以相互作用;5.采用慢病毒或干扰RNA转染的方法在颗粒细胞中敲低沉默BAP18基因,用ELISA方法检测颗粒细胞的培养基中雄激素和雌激素水平,并检测颗粒细胞的细胞周期是否受影响。结果:1.BAP18在多囊卵巢综合征组的表达显著低于对照组的表达,且BAP18的表达水平与多囊卵巢综合征的相关临床指标高度相关,通过数据分析发现BAP18表达与LH/FSH,T和AMH表达呈现负相关;2.在颗粒细胞中,BAP18和雄激素受体存在共定位和相互作用,并且BAP18可以上调AR介导的基因转录;3.BAP18的沉默可以下调AR下游靶基因CYP19A1和FSHR的表达,并且可以显著影响AR本身在其靶基因CYP19A1和FSHR雄激素反应元件上的招募并降低组蛋白H3K4me3的修饰水平;4.BAP18的沉默可以显著下调AR基因本身的表达,过表达BAP18可以显著上调AR基因本身的表达,然后我们发现在颗粒细胞中BAP18可以与AR最重要的驱动因子Sp1相互作用,并且BAP18可以与Sp1招募到AR启动子区Sp1的结合位点上,同时影响组蛋白H3K4me3,H3ac和H4ac的修饰水平;5.BAP18的敲低可以使颗粒细胞停滞在G1期,实验组BAP18敲低时G1期增加而S期减少,并且BAP18的敲低显著影响CYP19A1的表达,进而影响了雄激素到雌激素的转化。结论:1.BAP18在多囊卵巢综合征中低表达且与临床指征高度相关;2.BAP18可以与AR相互作用且上调AR介导的基因转录;3.BAP18可以通过影响AR的招募和组蛋白修饰水平影响AR下游靶基因CYP19A1和FSHR的表达;4.BAP18可以通过结合转录因子Sp1并影响其DNA结合区域组蛋白修饰显著影响AR基因本身的表达;5.BAP18可以影响颗粒细胞的细胞周期并影响颗粒细胞的雄激素-雌激素转化。