MAP9对EB病毒相关胃癌细胞增殖、凋亡的调控

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目的:检测MAP9(microtube-associated protein 9)基因在EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)感染的胃癌阴性和阳性细胞株中蛋白表达高低,探究MAP9表达的差异对EBV感染的胃癌阴性和阳性细胞增殖、凋亡产生可能的影响,为确定EBV在感染肿瘤发生中的作用,对进一步研究MAP9对EBV感染相关肿瘤的发生调控和发展机制提供了新的研究依据和实验思路。方法:采用蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测MAP9在EBV胃癌阳性细胞株和EBV胃癌阴性细胞株中的表达水平;用小干扰RNA(si RNA)干扰阳性胃癌细胞系GT38中MAP9基因的表达,Western blotting方法检测干扰效果和细胞周期素依赖性激酶(CDK6、CDK2、p21、p27)在干扰MAP9前后的表达变化情况,细胞增殖活性和毒性实验(cell counting kit-8)检测细胞增殖的变化,细胞流式技术检测干扰前后的细胞周期、细胞凋亡。采用质粒转染方法建立MAP9过表达EBV阴性胃癌AGS细胞株模型。实验数据采用合适的统计学方法进行处理和分析。结果:(1)EBV感染的胃癌阳性细胞株中MAP9蛋白水平为0.54±0.38,EBV感染的胃癌阴性细胞株中MAP9蛋白水平为0.18±0.19,MAP9基因在EBV感染的胃癌阳性细胞株中表达水平高(t=3.430,P=0.0265),统计学结果差异有意义;(2)MAP9的si RNA感染GT38细胞后,MAP9表达下降,差异有显著性(F=1039.000,P<0.001);CDK6、CDK2蛋白表达水平升高,差异均有显著性(F=79.350、102.800,P<0.001);细胞增殖数量明显升高,si-MAP9组吸光度值高于si-NC组,差异显著(F=576.700、95.210,P<0.001),细胞周期中处于S期的DNA百分率升高(t=2.880,P<0.05),细胞凋亡率明显降低(t=4.699 P<0.001)。(3)阴性AGS细胞系过表达MAP9后,p27、p21蛋白表达水平升高,差异均有显著性(F=2150.00、1434.00,P<0.001);细胞增殖数量明显升高,si-MAP9组吸光度值低于si-NC组,差异显著(F=197.700、112.400,P<0.001),细胞周期中处于S期的DNA百分率降低(t=18.390,P<0.001),细胞凋亡率明显升高(t=12.750,P<0.001),差异均显著。结论:(1)MAP9基因在EBV感染的胃癌阳性细胞株中高表达,在EBV感染的胃癌阴性细胞株中低表达,说明MAP9基因的表达受到EBV感染的影响。(2)MAP9可能通过调控相关周期激酶而影响EBV感染的相关胃癌细胞增殖与细胞凋亡。(3)由此推测MAP9在EBV感染相关胃癌的发生发展中发挥着抑癌基因的作用。
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