【摘 要】
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益生菌作为一种对宿主有利的微生物,它能在一定程度上影响宿主的某些菌群。通过调节机体的粘膜免疫功能,或者调节肠道内的菌群平衡,促进营养吸收,维持肠道健康。中国农业农村部于2020年7月1日颁布第194号公告,规定在饲料中禁止使用抗生素,意味着我们将全面进入“无抗时代”。已有众多研究表明益生菌作为一种安全有效的天然免疫调节物质,可作为优质替抗物的首选。本研究为“无抗”防治鸡沙门菌感染或鸡白痢的净化提供
【基金项目】
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新疆兵团重大科技项目计划子项目“新型乳肉兼用牛疫病综合防控体系的建立”（NO. 2021AA004）；
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益生菌作为一种对宿主有利的微生物,它能在一定程度上影响宿主的某些菌群。通过调节机体的粘膜免疫功能,或者调节肠道内的菌群平衡,促进营养吸收,维持肠道健康。中国农业农村部于2020年7月1日颁布第194号公告,规定在饲料中禁止使用抗生素,意味着我们将全面进入“无抗时代”。已有众多研究表明益生菌作为一种安全有效的天然免疫调节物质,可作为优质替抗物的首选。本研究为“无抗”防治鸡沙门菌感染或鸡白痢的净化提供依据。实验目的:体外筛选具有广谱抗菌活性的益生菌,动物实验验证其抗鸡沙门氏菌感染效果,为“替抗”益生菌制剂的研究奠定基础。实验方法:（一）候选益生菌的鉴定、益生特性评价及具有替抗活性益生菌的筛选:通过16s r DNA鉴定、自聚集能力、与致病菌的体外共聚集能力对15株候选益生菌进行鉴定及益生特性的评价,通过琼脂平板法以标准致病性大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及临床分离的10株野生致病菌为指示菌,从15株候选益生菌中筛选出抗菌活性最强的益生菌株。（二）检测其预防鸡白痢沙门菌感染的影响:将筛选出的体外抗菌活性强的益生菌L.C332饲喂三周龄雏鸡,1×10~9cfu/天,连续7天;并设立空白对照组;第7天经口灌服1×10~9cfu鸡白痢沙门氏菌同时感染实验组和感染对照组。感染后3天、7天、14天每组鸡剖杀3只,直至2周后全部剖杀。通过平板凝集实验检测血清中的鸡白痢抗体;使用ELISA试剂盒检测血清中IL-1β的表达;使用淋巴细胞分离试剂盒进行胸腺及外周血中淋巴细胞的分离,经Con A和PMA刺激后,检测T淋巴细胞增殖活性,通过LPS刺激检测抗原递呈细胞增殖活性;无菌采集肝脾及肠道内容物后,采用平板计数法检测各组肝脏及肠道中沙门氏菌属细菌和大肠杆菌属细菌含量。（三）检测其抗鸡白痢自然感染的影响:将SPF鸡随机均分为3组,益生菌组每日饲喂1×10~9cfu的L.C332,同时每日口服感染1×10~4cfu的鸡白痢沙门菌C79-1;感染对照组每日口服感染1×10~4cfu鸡白痢沙门菌C79-1;空白对照组饲喂基础日粮。每周采集的血清通过平板凝集法检测感染后每周血清中的鸡白痢抗体效价,4周后剖杀全部鸡只,无菌采集肝脾及肠道内容物后,用平板计数法测定各组肝脏及肠道中沙门氏菌属和大肠杆菌属细菌含量。实验结果:（一）15株候选益生菌经16S r DNA鉴定,分别为12株黏膜乳杆菌、1株肠链球菌、1株粪肠球菌、1株唾液乳杆菌;自聚集结果:L.C326、S.C270、L.C332共3株菌自聚集率较高;与致病菌共聚集能力显示:15株益生菌均与C79-1有较好的共聚集能力;其中,唾液乳杆菌L.C332对标准致病菌及从临床病鸡分离出的野生致病菌株均具有较强的抗菌活性;说明唾液乳杆菌L.C332具有广谱且较强的抗菌活性。（二）将唾液乳杆菌L.C332应用于抗C79-1攻毒感染动物实验,结果显示:提前饲喂益生菌能够减少沙门氏菌属细菌或其他病原菌如大肠杆菌属细菌在肝脏、脾脏及肠道内容物内定植;降低鸡的鸡白痢抗体转阳率;增强胸腺及外周血中抗原递呈细胞及T淋巴细胞的增殖活性;血清中细胞因子IL-1β的含量减少。（三）唾液乳杆菌L.C332抗鸡白痢沙门菌仿效自然感染的动物实验,结果表明:饲喂L.C332能够显著阻断鸡白痢沙门菌仿效自然感染时的抗体转阳率,感染后4周转阳率仅为10%（2/20）;而感染对照组抗体转阳率为80%（16/20）;饲喂益生菌能够显著减少沙门氏菌属细菌或其他细菌如大肠杆菌属细菌在肝脏及肠道内定植。说明唾液乳杆菌L.C332能够有效预防鸡白痢沙门菌在鸡群间的传播,提高SPF鸡抗鸡白痢沙门菌的感染能力。
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