大负荷运动及恢复期间大鼠骨骼肌超微结构及相关调节因子的研究

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目的:研究大负荷运动及其恢复期间大鼠骨骼肌超微结构及相关调节因子MGF、MYOD、MYOG的变化情况。方法:以36只8周龄健康雄性SD大鼠为研究对象。将其随机分为6组,每组6只:A,安静对照组(control, C); B力竭运动即刻组(exhaustive, EO); C力竭运动后12H组(E12);D力竭运动后24H组(E24);E力竭运动后48H组(E48);F力竭运动后72H组(E72)。各力竭运动组进行为期一周的负重力竭性游泳运动,并于末次力竭后的不同时间点宰杀取样。所有大鼠用乌拉坦腹腔麻醉、宰杀后迅速游离腓肠肌、股直肌,部分液氮冷冻保存待用,另一部分用2.5%戊二醛固定。采用EL ISA方法检测大鼠腓肠肌中机械生长因子MGF的表达,用WESTERN-BLOT检测大鼠腓肠肌中生肌调节因子MYOD, MYOG的表达情况,电镜下观察大鼠股直肌超微结构的变化情况。结果:1)经过一周大负荷游泳运动之后,电镜下观察大鼠股直肌的超微结构,安静对照组肌原纤维结构完整、排列紧密,横纹清晰,肌丝排列规则,能清楚的分辨出各带。大负荷运动后骨骼肌超微形态结构发生了程度不同的改变,这些改变在E0和E24更加明显。具体表现为细胞间质水肿、肌间隙增宽,内质网、线粒体可见有轻度变形,细胞核及核膜保存尚好;肌原纤维疏松变细,H带、I带界限不清,M线、Z线模糊,出现Z线扭曲、消失,部分基质变浅,排列混乱等。力竭运动组可明显看出线粒体变形、扭曲、肿大。2) ELISA结果显示,与对照组相比,经过一周大负荷游泳运动后,骨骼肌指标中机械生长因子MGF均有明显增加,力竭E12组、E24组与安静对照组相比有显著性差异(P<0.05)。血清指标中MGF也有相似变化。3) WESTERN-BLOT结果显示,经过一周大负荷游泳运动训练后,大鼠骨骼肌生肌调节因子MYOD在E12组开始表达增加,E48组达到高峰,与安静对照组相比,有显著性差异(P<0.05);MYOG在E24组开始表达增加,E72组达到高峰,与安静对照组相比,有显著性差异(P<0.05)结论:1)电镜结果显示:经过一周大负荷游泳运动能够引起骨骼肌超微结果较为显著的变化:肌纤维A带拉长,肌原纤维排列紊乱,Z线大范围内不规则,相邻间断裂,可见Z线流。内质网、线粒体结构模糊不清,嵴增多而紊乱,甚至消失。细胞间质水肿、肌间隙增宽等。2) ELISA结果显示,_大负荷运动及其恢复期间,大鼠骨骼肌中的MGF在恢复期明显增多。提示MGF可能加快肌肉组织损伤修复。3) WESTERN-BLOT表明,MYOD和MYOG在大负荷运动恢复期间呈规律性变化,MYOD在48小时达到峰值,MYOG在72小时达到峰值。本实验表明2种因子在运动性骨骼肌微损伤的再生修复过程中起到重要的作用,可作为反映肌肉再生的指标。而对于在不同的运动训练模型下,他们的表达及其在骨骼肌纤维亚型转变之间的联系,还有待进一步研究。
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