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[目的]本研究比较外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)致病菌株和复发性外阴阴道假丝酵母菌病(recurrent vulvovaginal candidiasis,RVVC)致病菌株侵袭力差异性:从动物实验及体外细胞实验方面探讨不同Sap酶活性白假丝酵母菌对小鼠RVVC感染率及阴道局部免疫的影响;明确IL-17在RVVC发生发展中的作用,探讨IL-17和中性粒细胞如何相互影响来参与RVVC局部免疫。为阐明RVVC发病机制提供理论依据,并为诊治RVVC提供新的方向。[方法]1.收集WC致病菌株100株和RWC致病菌株92株,以沙堡罗培养基分离纯化。安图显色培养基及VITEK 2系统选取上述菌株中的白假丝酵母菌进行后续实验。2.使用牛奶培养基和蛋黄培养基对所有白假丝酵母菌菌株进行Sap、Plb酶活性分析。3.选取Sap酶活性最强(Sap=0.242)和Sap酶活性最弱(Sap=0.731)的白假丝酵母菌构建小鼠RVVC模型,计算不同发病阶段感染率;并使用HE染色和透射电镜对不同发病阶段阴道上皮进行观察。4.使用炎症因子抗体芯片对RVVC小鼠第二次感染后的阴道灌洗液进行多因子分析,qRT-PCR验证差异因子。5.使用ELISA法测定差异因子IL-4、IL-17和IL-8在RVVC不同发病阶段阴道灌洗液中的含量。6.酶消化法体外培养人和小鼠原代阴道上皮细胞,与不同Sap酶活性白假丝酵母菌共培养,ELISA方法检测共培养后细胞上清液中IL-4、IL-8和IL-17的含量。7.使用卤夫酮构建不同Th17含量的VVC小鼠模型,分为对照组、卤夫酮0μg组、卤夫酮5μg组和卤夫酮10μg组。流式细胞术检测四个组中小鼠体内Th17的含量,瑞氏染色观察阴道内中性粒细胞数量,沙式琼脂培养基平皿上检测阴道载菌量,HE染色检测阴道上皮损伤情况,免疫组化染色检测IL-17、Cleaved-Caspase3在阴道上皮中的表达;Tunel染色检测阴道上皮凋亡细胞数。8.收集对照组和卤夫酮0μg组小鼠阴道中性粒细胞,流式细胞术检测中性粒细胞内IL-17的表达;Tunel染色检测中性粒细胞凋亡情况;Western Blot检测中性粒细胞中IL-17及中性粒细胞凋亡相关蛋白表达情况。9.用IL-17、IL-17抗体、对照组小鼠血清、感染小鼠血清与小鼠中性粒细胞共培养,Transwell检测中性粒细胞迁移情况;用流式细胞术、Tunel染色、Western Blot检测共培养12h后中性粒细胞的凋亡率及凋亡相关蛋白表达情况。[结果]1.C.albicans在VVC致病菌株和RVVC致病菌株中所占比例分别为95%和93.5%,两者比较无统计学差异。2.VVC致病菌株的Sap酶活性显著强于RVVC致病菌株;Plb酶活性在VVC菌株和RVVC菌株间无显著差异。3.Sap酶活性弱和Sap酶活性强的白假丝酵母菌均能构建小鼠RVVC模型。两组小鼠第三次的感染率最低,Sap酶活性强组在第三次的感染率显著低于Sap酶活性弱组。HE染色及透射电镜显示阴道上皮损伤不随感染反复而加重,且Sap酶活性强组和Sap酶活性弱组之间比较无明显差异。4.多因子分析及qRT-PCR方法显示二次感染VVC后阴道上皮高表达IL-4和IL-17,且两个因子在Sap酶活性强组和Sap酶活性弱组的表达有差异。5.相较于对照组,阴道内IL-4、IL-8和IL-17在RVVC不同发病阶段的含量均增加。Sap酶活性强的白假丝酵母菌能刺激阴道上皮分泌更多的免疫因子,尤其是IL-17;Sap酶活性强组第二次感染后IL-17的高表达与第三次的低感染率相关。6.体外实验证实人和小鼠阴道上皮细胞具有分泌IL-4、IL-8、IL-17的能力,Sap酶活性高的白假丝酵母菌能刺激人和小鼠阴道上皮产生更高的免疫因子,以IL-17的增高更为显著。7.小鼠阴道内白假丝酵母菌落数/菌丝数、阴道上皮损伤严重程度与血清中Th17含量成反比;小鼠阴道内中性粒细胞数目随Th17降低而减少。8.VVC小鼠阴道内中性粒细胞的IL-17含量增多,而且中性粒细胞的凋亡增强。9.IL-17可趋化中性粒细胞并促进中性粒细胞凋亡;VVC小鼠血清也有趋化中性粒细胞及增强中性粒细胞凋亡的作用。[结论]1.白假丝酵母菌是引起VVC及RVVC的主要致病菌,VVC致病白假丝酵母菌的Sap酶活性强于RVVC致病白假丝酵母菌。2.Sap酶活性弱的白假丝酵母菌更容易引起RVVC,但RVVC不同发病阶段中阴道上皮的形态学改变与Sap酶活性无明显关系。3.RVVC发病进程中,第二次感染后阴道上皮产生的免疫反应最强。4.白假丝酵母菌能在短时间内激活阴道上皮细胞产生大量细胞因子。Sap酶活性强的白假丝酵母菌诱发产生的细胞因子更多,尤其以IL-17为主,从而降低RVVC的感染率。5.人和小鼠阴道上皮细胞在受到白假丝酵母菌感染时所产生的细胞因子变化情况基本一致。5.Th17和IL-17在RVVC发病进程中起到保护作用,IL-17可以通过促进中性粒细胞凋亡来保护阴道局部组织。6.RVVC发病进程中,阴道内的中性粒细胞可自分泌方式产生IL-17。