呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)能够引发严重的下呼吸道感染,给世界经济带来了极大的负担。临床上用于治疗的药物利巴韦林,因为其极大的副作用,只用于危重病人。疫苗虽在研发,但仍然没有上市可用的疫苗。所以寻找新的对呼吸道合胞病毒有效的药物,就显得尤其重要。本课题的目的是对一系列丁烯内酯类化合物和甾体吡啶类化合物进行筛选,找出安全有效的化合物,评价其抗病毒活性,并探究其抗病毒作用机制。首先我们在细胞水平上筛选化合物。我们采用MTT法和CPE法,从36个丁烯内酯类化合物和26个甾体吡啶类化合物中进行筛选。先评价化合物的半数抑制浓度CC50值,然后用100 TCID50测试化合物的抗病毒活性,并测出化合物的半数有效浓度EC50值,计算治疗指数SI。选出毒性弱,活性高,治疗指数最高的化合物4L,接着对其预防、直接阻断、治疗作用进行探究。我们又分别选取在病毒感染细胞0h,2 h,4h,6h,8h,10h,12h,24h时添加药物,测试不同时间添加化合物对化合物对病毒的抑制作用的影响。qRT-PCR检测在病毒感染Hep-2细胞后,加入化合物4L 24 h后,TLR-3及RIG-I通路的关键因子TLR-3、RIG-I、IL-6、IFN-β的变化。接着我们建立了动物感染模型,进一步探究化合物的体内作用机制。我们首先把126只小鼠分为6大组,18小组。给实验组小鼠滴鼻感染病毒,给正常对照组小鼠感染同等量的纯培养基,24 h后,给药,连续5天。分别在病毒感染后的第2、4、6天解剖小鼠,收集肺组织。HE染色检测小鼠肺组织炎性病变情况,免疫组化检测小鼠肺组织中病毒抗原的表达量,qRT-PCR检测小鼠体内病毒M基因、细胞因子TLR-3、RIG-I、IL-6、IFN-β、IL-10的表达量。实验结果显示,化合物4L对细胞毒性小,抗病毒活性高,治疗指数大。在抗病毒机制探索中,发现其主要起治疗作用。分时间段添加化合物发现,化合物4L在病毒感染后2 h添加,抗病毒效果最好,在感染后4～12h添加,对病毒的抑制率维持在70%左右,在感染后24 h添加化合物几乎不起抗病毒作用。qRT-PCR实验表明化合物4L能够抑制TLR-3和RIG-I通路中的关键因子TLR-3、RIG-I、IL-6、IFN-β的上调。以上结果表明,化合物4L主要通过抑制病毒的复制和抑制炎性因子的上调在细胞水平上发挥抗病毒作用。在动物水平上,化合物4L能够改善因为病毒感染造成的小鼠体重下降,精神萎靡不振等症状。能够降低因为病毒感染造成的肺指数升高,能够缓解因为病毒感染引起的炎性反应、肺损伤。化合物4L通过降低肺组织中病毒抗原的表达,降低病毒M基因的复制,降低TLR-3、RIG-I信号通路关键细胞因子TLR-3、RIG-I、IL-6、IFN-β的上调,降低细胞因子IL-10的表达,发挥抗炎和维持免疫平衡作用,缓解肺损伤。综上所述,甾体类化合物4L体内外都具有良好的抗呼吸道合胞病毒的作用。