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目的用BMP4诱导hESC分化为滋养干细胞样细胞后持续扩增，建立hESC来源的滋养干细胞系并鉴定其特征。
方法无饲养层条件下用10ng/ml浓度的BMP4诱导单细胞hESC细胞系H9分化为滋养干细胞样细胞，通过添加EGF，Wnt信号激动剂，TGFβ、HDAC及ROCK信号抑制剂的培养基维持细胞增殖传代，运用免疫荧光、流式等方法检测CTB标志物CDH1、EGFR、P63、TFAP2C、CDX2、和TEAD4，单核滋养细胞标志物GATA3，滋养细胞共同标志物KRT7，EVT标志物HLA-G，STB标志物SDC1，hESC的标志物OCT4的表达情况，计算TS建系过程中CDH1和KRT7的阳性细胞率，绘制细胞增殖曲线，并通过NRG1+Matrigel或Forskolin使TS分别向EVT及STB分化。
结果BMP4诱导hESC分化四天的细胞光镜下呈现单核的扁平的滋养干细胞样形态，此时CDH1、EGFR，KRT7的阳性细胞率分别为81.00%，58.00%和75.67%，证明此分化体系的效率较高。之后该细胞能在TSmedium中良好适应。传至第三代的细胞CDH1的阳性比例为88.08%，KRT7的阳性比例为91.38%，表达GATA3，P63，TFAP2C，CDX2和TEAD4，不表达HLA-G，HCG和OCT4，并且可以同时向EVT、STB样细胞分化，证明获得了高纯度的TS细胞。但是随着培养时间的延长，TSP5的EGFR阳性率降为12.5%，CDH1及KRT7阳性比例也出现下降，但仍有约60%的细胞表达CTB的标志物。之后，在TS传代至第七代时细胞增殖能力明显减弱，几乎检测不到CDH1和KRT7的表达。
结论BMP4诱导hESC模型可以获得增殖能力有限的滋养干细胞，之后仍需要进一步优化此分化模型的培养体系。同时需要进一步鉴定我们获得的TS究竟属于滋养细胞发育的何种阶段。
方法无饲养层条件下用10ng/ml浓度的BMP4诱导单细胞hESC细胞系H9分化为滋养干细胞样细胞，通过添加EGF，Wnt信号激动剂，TGFβ、HDAC及ROCK信号抑制剂的培养基维持细胞增殖传代，运用免疫荧光、流式等方法检测CTB标志物CDH1、EGFR、P63、TFAP2C、CDX2、和TEAD4，单核滋养细胞标志物GATA3，滋养细胞共同标志物KRT7，EVT标志物HLA-G，STB标志物SDC1，hESC的标志物OCT4的表达情况，计算TS建系过程中CDH1和KRT7的阳性细胞率，绘制细胞增殖曲线，并通过NRG1+Matrigel或Forskolin使TS分别向EVT及STB分化。
结果BMP4诱导hESC分化四天的细胞光镜下呈现单核的扁平的滋养干细胞样形态，此时CDH1、EGFR，KRT7的阳性细胞率分别为81.00%，58.00%和75.67%，证明此分化体系的效率较高。之后该细胞能在TSmedium中良好适应。传至第三代的细胞CDH1的阳性比例为88.08%，KRT7的阳性比例为91.38%，表达GATA3，P63，TFAP2C，CDX2和TEAD4，不表达HLA-G，HCG和OCT4，并且可以同时向EVT、STB样细胞分化，证明获得了高纯度的TS细胞。但是随着培养时间的延长，TSP5的EGFR阳性率降为12.5%，CDH1及KRT7阳性比例也出现下降，但仍有约60%的细胞表达CTB的标志物。之后，在TS传代至第七代时细胞增殖能力明显减弱，几乎检测不到CDH1和KRT7的表达。
结论BMP4诱导hESC模型可以获得增殖能力有限的滋养干细胞，之后仍需要进一步优化此分化模型的培养体系。同时需要进一步鉴定我们获得的TS究竟属于滋养细胞发育的何种阶段。