背景与目的:高促甲状腺素抗体（Thyrotrophinreceptorautoantibody,TRAb）滴度和甲状腺肿是 Graves 病（Graves’ disease,GD）抗甲状腺药物（Anti-thyroid drugs,ATD）后复发的重要预测因素。因此,进一步认识GD发生发展中TRAb与甲状腺肿的关系及相关机制,有助于提高GD治疗缓解率,降低GD复发率。早期研究已证实,TRAb通过促进甲状腺滤泡细胞的肥大与增殖参与GD患者甲状腺肿大的发生。甲状腺是一个高度血管化的腺体,血管新生在甲状腺肿和肿瘤形成过程中同样扮演重要角色。我们推测,TRAb可能通过促进血管新生也参与GD患者甲状腺肿的发生。然而,目前关于TRAb的直接促血管新生作用及GD甲状腺肿形成的具体机制尚不清楚。本研究旨在评价不同浓度TRAb下的血管生成效应,探索血管内皮细胞中差异表达蛋白,进一步了解GD患者甲状腺肿大的发病机制。方法:通过免疫荧光共染观察GD患者甲状腺组织和甲状腺癌患者癌旁正常组织微血管密度相关蛋白CD34和环磷酸腺苷活化交换蛋白1（Exchange proteins directly activated by cyclic adenosine monophosphate 1,Epac1）的表达情况,并对Epac1的表达进行定位。免疫组化法检测人甲状腺GD组织、癌旁正常甲状腺组织上不同血管新生标志物的表达差异。细胞计数法检测不同剂量TSH和TSHR单克隆抗体（M22）对人甲状腺滤泡上皮细胞系（Human thyroid follicular epithelial cell,Nthy-ori 3-1）和原代人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）活力的影响。采用划痕实验和小管形成实验检测不同浓度M22和促甲状腺激素（Thyroid stimulating hormone,TSH）刺激下血管内皮细胞迁移能力和小管形成能力。通过qPCR和Western blot方法初步检测M22刺激下血管内皮细胞和甲状腺细胞中关键血管生长因子的表达情况。进一步利用蛋白组学技术检测M22刺激Nthy-ori 3-1和HUVEC后引起的血管生成因子表达的变化,同时筛选出M22调控这些血管生成因子的信号通路。结果:免疫荧光共聚焦显示,GD患者甲状腺组织中,CD34+微血管密度增加,Epac1的表达增加,且其在血管内皮细胞中高表达。免疫组化显示,血管生成标记物Delta样配体4在GD甲状腺组织内有显著高表达。体外研究表明,M22以剂量依赖的方式持续刺激Nthy-ori 3-1 和 HUVEC 的增殖。与 M22 相比,在 TSH 作用下,Nthy-ori 3-1 和 HUVEC 的增殖呈倒U型曲线。低剂量TSH（≤0.625 mIU/ml）刺激后,Nthy-ori 3-1增殖呈剂量依赖性,而高剂量TSH（＞0.625 mIU/ml）显著降低了 Nthy-ori 3-1的增殖率。此外,低剂量TSH（≤1.25mIU/ml）刺激后HUVEC增殖呈剂量依赖性,而高剂量TSH（＞1.25mIU/ml）刺激后HUVEC增殖率下降。细胞划痕实验和小管形成实验显示,与对照组相比,外源性M22和TSH以浓度依赖的方式促进HUVEC细胞迁移能力和小管形成能力。在M22作用下,滤泡细胞中血管内皮生长因子A表达明显升高,内皮细胞中促甲状腺激素受体表达增加。应用蛋白质组学技术筛选出40个差异表达蛋白,包括16个上调和24个下调的差异蛋白,结合生物信息学分析及文献报道,转录因子Prospero同源盒1是M22处理HUVEC后显著上调的差异蛋白。结论:TRAb可能具有双重促血管生成作用,一方面,TRAb可通过血管内皮细胞上的TSHR直接促进血管内皮细胞增殖和血管生成;另一方面,TRAb可能通过增加甲状腺滤泡细胞血管内皮生长因子A的分泌,激活临近内皮细胞,从而促进血管生成。转录因子Prospero同源盒1可能是影响GD甲状腺肿血管生成的重要调控因子,参与GD患者甲状腺肿大的发生。