藤茶总黄酮及二氢杨梅素的提取分离纯化研究

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藤茶,植物学名显齿蛇葡萄[Ampelopsis grossedentata (Hand—Mazz)w. T. Wang],葡萄科(VitaceaeMiehx)蛇葡萄属(Ampelopsis),野生藤本植物。显齿蛇葡萄全株药用,味甘、淡,性凉,具有清热解毒、祛风湿、强筋骨等功效。用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症。化学成分研究表明,显齿蛇葡萄中黄酮类成分含量高达30%左右,其中二氢杨梅素(dihydromyricetin, DMY)含量20%左右。从藤茶茎叶中提取的总黄酮具有抗血栓、降脂、保肝、降血糖、抗炎、镇痛和提高免疫功能的作用。二氢杨梅素(dihydromyricetin, DMY)是其中最重要的黄酮类化合物,据报导DMY具有消炎、止咳、祛痰、镇痛、抑菌、抗高血压、消脂以及解乙醇中毒等药理作用。所以藤茶总黄酮和DMY在食品、保健品以及医药方面有广泛的应用前景。目前关于藤茶深加工方面尚未见到商品化产品的报道,选择和确立适用于藤茶总黄酮类成分和DMY提取分离纯化工艺与藤茶资源的深度开发利用密切相关。这将有利于藤茶总黄酮及DMY的充分开发利用,减少环境污染。本课题在前期研究的基础上做了以下方面研究:1.建立了藤茶总黄酮及DMY含量测定方法。以DMY为对照品,采用紫外分光光度法对DMY对照品溶液在200-800nm进行波长扫描,确定290nm为最大吸收波长。通过考察5%AlCl3乙醇溶液、2%ZrOCCl2乙醇溶液和不加显色试剂对紫外吸收的影响,发现三种方法结果相差不大,所以采用不加显色剂的紫外分光光度法测定藤茶中总黄酮的含量。以DMY为对照品,色谱柱系为sinochrom ODS-BP (250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-磷酸(27:73:0.1),流速为1.0mL·min-1,进样量为20μL,柱温:25℃,检测波长:290 nm的高效液相方法测定藤茶中DMY的含量。2.明确了新鲜藤茶的不同炮制加工及不同产地的含量差别。考察阴干、晒干、50℃烘干、70℃烘干、90℃烘干、110℃烘干130℃烘干对藤茶总黄酮及DMY的影响,总结出最佳的藤茶干燥方法以70℃烘干较为适宜,确定藤茶的最佳干燥温度为70℃。3.优选了藤茶总黄酮提取工艺。通过比较总黄酮提取率、总黄酮中DMY提取率、紫外分光光度测定总黄酮含量、高效液相测定总黄酮中DMY含量为参考指标,利用正交实验法优选藤茶总黄酮的提取工艺。优选出最佳传统提取工艺为物料比10倍用量,乙醇浓度70%,提取温度70℃,提取2次的提取方法。本研究为设计中药罐组式动态逆流提取方法提供了基本的理论参数。4.藤茶总黄酮及DMY的纯化方法研究通过考察甲醇、乙醇、丙酮、水四种不同溶剂以及最佳溶剂的用量和活性碳吸附剂的用量对DMY纯度及得率的影响。优选出最佳的纯化工艺:用90倍水加1%的活性炭进行重结晶,在0-4℃放置24h再过滤,重复10次以上DMY纯度可达98%以上。5.大孔吸附树脂对重结晶母液中总黄酮的富集工艺研究通过静态吸附考察四种大孔吸附树脂HPD-100、NKA-9、AB-8、D-101对藤茶总黄酮的吸附和解吸附性能,优选出富集效果最佳的HPD-100大孔吸附树酯,并对HPD-100大孔吸附树脂动态吸附参数、放大试验、循环使用等进行了考察,结果表明HPD-100大孔吸附树脂可用于富集藤茶总黄酮,富集工艺为:重结晶母液PH=3,流速2BV/h,柱1吸附的穿透点在6BV,吸附重结晶母液20BV;柱2吸附柱1的漏’出液后,再吸附12BV重结晶母液;柱3吸附柱2的漏出液后,再吸附重结晶母液12BV;柱3的漏出液被再生的柱1继续吸附,由3根树脂柱组成一个串联系统,如此循环操作,吸附30min后用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用40ml/g(干树脂)的70%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,干燥,即得大孔树脂富集的藤茶总黄酮,再用水反复重结晶进行纯化。
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