基于Wnt/β-catenin信号通路探究电针对APP/PS1转基因小鼠认知功能的影响

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hujialian
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研究目的以APP/PS1转基因小鼠模型为研究对象,电针针刺“百会、肾俞”进行干预,通过观察干预后小鼠的行为学数据、海马组织神经细胞形态学变化、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在海马中的表达,探究电针对APP/PS1转基因小鼠认知功能及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。研究方法选用4月龄APP/PS1转基因雄性小鼠32只,同背景、月龄的C57BL/6J雄性小鼠8只。将8只C57BL/6J小鼠作为空白组,将32只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、电针西药组、电针组及西药组各8只。通过《实验针灸学》中小鼠穴位定位方法,定位百会穴和肾俞穴。先针刺百会穴,双侧肾俞穴,并分别给予电流刺激,疏密波,频率1Hz/50Hz,强度0.5mA,以针柄略微震颤、小鼠安静不排斥为宜,持续15min,每日1次,7天为一个疗程,共3个疗程。西药选择盐酸多奈哌齐,1mg/(kg·d)盐酸多奈哌齐溶于2ml生理盐水灌胃。干预:①空白组:只取穴,不针刺,同时给予西药组相同量的生理盐水灌胃,每天1次,共21天。②模型组:只取穴,不针刺,同时给予西药组相同量的生理盐水灌胃,每天1次,共21天。③电针西药组:针刺百会穴、双侧肾俞穴,分别给予电流刺激,同时给予西药组相同剂量的盐酸多奈哌齐溶液灌胃,每天1次,共21天。④电针组:针刺百会穴、双侧肾俞穴,分别给予电流刺激,持续15min,每日1次,共21天。⑤西药组:1mg/(kg·d)盐酸多奈哌齐溶于2ml生理盐水灌胃。每日1次,共21天。药物干预前后,对所有小鼠进行水迷宫实验。实验结束后,取海马,通过HE观察海马病理变化,Western Blot观察Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。研究结果1.干预后水迷宫实验结果逃避潜伏期:在定位航行实验中,干预后,电针西药组、电针组、西药组逃避潜伏期较干预前明显缩短(P<0.05),明显短于模型组(P<0.05)。从轨迹来看,干预前模型组、电针西药组、电针组、西药组小鼠游泳轨迹复杂混乱,盲目性大;干预后总路程变短、目的性增强,模型组小鼠游泳轨迹无明显变化。目标象限停留时间、穿越平台次数:在空间探索实验中,干预前,与空白组相比,模型组、电针西药组、电针组、西药组的目标象限停留时间较短、穿越平台次数少(P<0.05)。干预后,电针西药组、电针组、西药组的目标象限停留时间明显延长、穿越平台次数增多(P<0.05)。从轨迹来看,干预前模型组、电针西药组、电针组、西药组小鼠游泳轨迹无规律,目标象限内轨迹稀疏,整体盲目性大;干预后电针西药组、电针组、西药组小鼠在目标象限内轨迹较为密集,且多在原平台位置及附近处游动,目的性较大;模型组无明显变化。2.HE结果HE染色结果显示,空白组小鼠海马神经元轮廓清晰、形态完整、层次分明,排列紧凑规整;模型组小鼠海马神经元排列混乱无序,间隔疏松,细胞核缩小,核仁不明显或丢失,神经元损伤明显;与模型组小鼠比较,各治疗组小鼠的海马神经元在形态、数量、排列上经干预后有所改善;与西药组和电针组相比,电针西药组小鼠海马神经元与空白组更接近,细胞规整有序,数量较前变多。3.Western Blot 结果Western Blot结果显示,与空白组相比,模型组小鼠中的APC、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达明显下降(P<0.05),GSK-3β蛋白表达明显增多(P<0.05);与模型组相比,电针西药组、电针组、西药组中的APC、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达增多(P<0.05),GSK-3β 蛋白表达下降(P<0.05)。研究结论1.通过水迷宫实验和HE染色结果,说明电针刺激“百会、肾俞”可改善APP/PS1转基因小鼠认知功能障碍;2.通过western blot结果,说明电针刺激“百会、肾俞”可改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路保护神经元有关,电针西药组疗效更优。
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