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目的由于分子物种来源的差异,传统的使用兔补体的补体依赖的细胞毒(complement-dependent cytotoxicity,CDC)技术可能不足以反映人补体调节蛋白(complement regulatory protein,CRP)在受者体内实际的补体调节作用。本研究在人血清抗体介导的CDC体系中,比较商品化标准人补体和兔补体对GTKO/h CD55基因工程猪细胞的CDC的差异。方法选择来自同一品系的α1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(α1,3-galactosyltransferase gene knockout,GTKO),GTKO/h CD55Low(转入的h CD55低表达)和GTKO/h CD55High(转入的h CD55高表达)猪。将三头猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)分别与20位健康成人志愿者的混合血清孵育后,流式细胞仪检测猪PBMCs的抗体(Ig M,Ig G)结合,兔补体和人补体依赖的细胞毒以及猪PBMCs上人补体成分(C3c,C4c,C5b-9)沉积。结果三头猪PBMCs与人异种反应性抗体的结合无明显差异。兔补体和人补体对GTKO猪PBMCs的细胞毒分别为(98.97±0.29)%和(82.73±1.85)%,均提示强烈的细胞毒作用。低表达h CD55对兔补体依赖的细胞毒无明显抑制作用(98.97%±0.29%vs.97.07%±1.30%;P=0.2267;n=3),而高表达h CD55对兔补体依赖的细胞毒有轻度的抑制作用(98.97%±0.29%vs.81.70%±3.39%;P=0.0355;n=3)。不同的是,低表达h CD55对人补体依赖的细胞毒即有显著的抑制作用(82.73%±1.85%vs.23.83%±2.04%;P<0.0001;n=3);且相较于低表达h CD55,高表达h CD55对人补体依赖的细胞毒有进一步抑制作用(23.83%±2.04%vs.2.94%±0.17%;P=0.009;n=3),使之接近阴性对照水平。这提示转基因h CD55表达水平依赖性抑制人补体依赖的细胞毒。低表达或高表达h CD55对人补体依赖的细胞毒的抑制作用均显著强于对兔补体依赖的细胞毒的抑制作用(P<0.0001;P=0.0018)。此外,转基因h CD55表达水平依赖性抑制猪PBMCs上人补体成分(C3c和C5b-9)的沉积。结论相较于传统的使用兔补体的CDC技术,使用商品化标准人补体的CDC技术评价GTKO/h CD55基因工程猪细胞表面h CD55的调节作用具有明显优势。目的探讨GTKO/SLAⅠKO基因工程猪到猕猴异种肾移植术后,急性体液性异种移植物排斥反应(acute antibody-mediated rejection,AHXR)对异种移植物的影响以及对介导AHXR的抗体进行分析。方法将GTKO/SLA I KO/h CD55/h CD46/h EPCR/h TBM(敲除Gal和猪白细胞抗原Ⅰ类分子,转入人源性补体调节蛋白和凝血调节蛋白基因)猪的肾脏移植给三例猕猴。因异地供体肾脏转运,冷缺血时间较长,术中只切除受者自体单侧肾脏,术后第八天切除另一侧自体肾脏。采用利妥昔单抗和兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白诱导治疗;他克莫司+吗替麦考酚酯+强的松三联免疫抑制剂维持治疗。观察受者存活情况,待移植物失功(血肌酐>700μmol/L)后,主动处死受者并切除移植物,并对移植物进行HE、免疫组化和免疫荧光检测。留取受者术前和处死当天血清,以GTKO和GTKO/β4Gal NT2-KO(敲除Gal和Sda)猪PBMCs为靶细胞,通过抗体结合实验对血清抗体进行分析。结果三例受者中,一例因麻醉意外而在术中死亡,另外两例存活时间分别为17天和19天。一例移植物HE、免疫组化和免疫荧光染色检测结果提示血栓性微血管病(thrombotic microangiopathy,TMA),但不排除AHXR的可能;另一例提示典型的AHXR和TMA。除预存抗体外,两例受者术后诱导产生的新生抗体可能介导了AHXR的发生。一例受者的诱导抗体包括:(i)针对猪RBCs和PBMCs上都表达的未知异种抗原的诱导抗体,(ii)针对仅在猪PBMCs上表达的未知异种抗原的诱导抗体;另一例受者的诱导抗体包括上述类别诱导抗体和针对Sda的诱导抗体。结论AHXR和TMA是影响异种移植物长期存活的重要因素。除预存抗体外,Sda和未知异种抗原诱导产生的抗体也可能在AHXR中发挥了重要作用。