背景：　　创面愈合是一个复杂而有序的生物学过程，通常将其分为凝血期、炎症反应期、增殖期和重塑期。任何干扰创面愈合调控环节的内源性或外源性的因素均可影响创面愈合的生物学过程，当皮肤遭受损伤，愈合涉及炎症反应、细胞增殖、迁移，创面重塑等多个序贯又相互交叉的病理生理过程。细胞、细胞外基质、炎性介质及各种生长因子均参与了创面愈合的过程，它们通过相互作用构成了复杂的创面愈合网络调控关系，使创面愈合以可预见的生物学步骤，按时相规律有序地进行组织学修复。　　如何获得更好的愈合质量一直是众多学者研究的热点，因为影响创面愈合的因素有很多，所以相应的促创面愈合的手段和方法也较多。在众多方法中，低剂量光线疗法（LLLT, Low Level Laser(Light) Therapy）作为一种安全有效的物理手段受到了研究人员越来越多的关注。在诸多皮肤问题中，LLLT已经被验证对皱纹、痤疮瘢痕、增生性瘢痕和烧伤均有积极的影响。另外，LLLT还可以作为一种预防和治疗的手段，有效减轻紫外线对皮肤的伤害；在色素性疾病中，LLLT可以通过刺激黑色素细胞来增加色素沉着，从而治疗白癜风。创面愈合的问题不仅仅包括愈合“不良”，还常常包括愈合“过度”，愈合“不良”主要是指愈合速度缓慢，常见于慢性的溃疡创面。愈合“过度”则多指创面愈合过程中瘢痕尤其是病理性瘢痕的产生。　　然而，既往的研究大多较为单一或混乱，不同学者在实验中所使用的细胞种类不尽相同，常常是某一研究人员仅对皮肤的一种细胞做了研究，另外，由于采用的细胞来源（人或动物）、发光设备（laser或 LED）、波长、强度、能量、照射时间等差异较大，导致实验结果往往不完全一致甚至互相矛盾，能提供的临床治疗启示往往较为有限。本实验中采用安全性更高、适用范围更广的LED作为发光设备，分别采用640nm和465nm波长对同一物种（C57BL/6鼠）皮肤的三种主要细胞（成纤维细胞、微血管内皮细胞、表皮细胞）同时进行了观察，并参阅大量文献最终选取三种不同能量密度（6J/cm2、12J/cm2、24J/cm2），观察其对这三种创面修复主要参与细胞生物学行为（迁移、增殖）的影响，从而探索640nm和465nm的LED光在创面愈合中的作用，寻求在不同的创面问题中（愈合不良还是愈合过度），如何更好地利用这两种可见光，从而获得更满意的愈合结果。　　第一部分：观察640nm LED光对人正常皮肤角质形成细胞迁移、增殖能力的影响　　目的：　　研究离体情况下，640nm的LED光对人正常皮肤的原代角质细胞的生物学行为是否有影响　　方法：　　1.细胞划痕实验：将人角质细胞种植于12孔板，细胞融合至90％左右，用200μl枪头在孔板中央纵向划宽度约为1mm的划痕，划痕后以 PBS洗去漂浮的细胞碎片，给予能量密度为12J/cm2的光照，倒置荧光显微镜下观察0，6，12，24小时划痕愈合情况并拍照（40倍）。　　2.Transwell实验：将人角质细胞接种于transwell上室中，24小时贴壁后给予能量密度为12J/cm2的光照，光照后12小时观察迁移至下室的细胞数量。　　3.细胞增殖实验：将人角质细胞种植于96孔板中，24小时贴壁后给予能量密度为12J/cm2的光照，24小时后每孔加入10μl CCK8，孵箱中继续培养2小时，于酶标仪检测450nm下的吸光度值。　　4.细胞骨架实验：将人角质细胞种植于细胞爬片上，待细胞贴壁后给予能量密度为12J/cm2的光照，后分别在3小时和6小时对细胞进行 F-actin染色，观察细胞骨架的变化。　　结果：　　1.640nm LED光在能量密度为12J/cm2时对人正常皮肤角质形成细胞的迁移能力有促进作用。　　2.640nm LED光在能量密度为12J/cm2时对人正常皮肤角质形成细胞的增殖能力没有明显影响。　　3.人角质细胞在接受光照后细胞骨架产生了明显的变化，表现在丝状伪足和层状伪足增多。　　结论：　　640nm LED光在能量密度为12J/cm2时可能通过对角质细胞骨架结构的改变，影响其迁移能力从而加快了创面愈合的速度。　　第二部分：观察640nm和465nm波长的LED光对C57BL/6鼠皮肤成纤维细胞、微血管内皮细胞以及表皮细胞迁移、增殖能力的影响　　目的：　　研究离体情况下，640nm和465nm波长的LED光对创面愈合的三种主要参与细胞生物学行为的影响，从而探讨应该如何更加合理地使用红蓝光，获得更加理想的愈合质量。　　方法：　　1.细胞划痕实验：将三种细胞种植于12孔板，细胞融合至90%左右，用200μl枪头在孔板中央纵向划宽度约为1mm的划痕，划痕后以 PBS洗去漂浮的细胞碎片，分别给予能量密度为6J/cm2、12J/cm2、24J/cm2的光照，倒置荧光显微镜下观察0，24，48（如果需要的话）小时划痕愈合情况并拍照（40倍）。　　2.细胞增殖实验：将三种细胞种植于96孔板中，24小时贴壁后分别给予能量密度为6J/cm2、12J/cm2、24J/cm2的光照，24小时后重复一次，首次光照48小时后每孔加入10μl CCK8，孵箱中继续培养2小时，于酶标仪检测450nm下的吸光度值。　　结果：　　1.640nm的LED光在能量密度为12J/cm2时对成纤维细胞的增殖能力有促进作用。　　2．640nm的LED光在能量密度为6J/cm2和12J/cm2时对微血管内皮细胞的迁移、增殖能力均有促进作用。　　3．640nm的LED光在能量密度为12J/cm2和24J/cm2时对表皮细胞的迁移、增殖能力均有促进作用。　　4．465nm的LED光在能量密度为6J/cm2、12J/cm2和24J/cm2时对成纤维细胞、微血管内皮细胞和表皮细胞的迁移、增殖能力均有明显的抑制作用。　　结论：　　应视不同的创面愈合问题和各细胞参与修复的时间，合理利用红蓝光，从而获得更加理想的愈合质量。