论文部分内容阅读
目的:基于microRNA-503在糖尿病血管并发症中对血运重建的负性调控作用,揭示糖尿病脑梗死等血管并发症的病理机制,探索复元醒脑汤对糖尿病脑梗死后血管新生的分子机制及具体作用靶点,为临床防治糖尿病脑梗死提供新的思路和方法。 方法:健康雄性SD大鼠,随机分为:正常对照组、假手术组、模型组、西药治疗组、中药治疗组。完成糖尿病及脑梗死的造模。中药治疗组予以复元醒脑汤灌胃;西药治疗组予以二甲双胍和尼莫地平灌胃;假手术组、模型组予以生理盐水灌胃。测定大鼠血糖、血清胆固醇、甘油三酯浓度,测定神经缺损行为体征评分,免疫荧光法检测脑梗死区域的血管新生、微循环观察仪检测脑梗死区域血管微循环状况、实时荧光定量PCR法检测脑组织microRNA-503、CCNE1、CDC25A基因表达水平,利用Western blotting检测CCNE1、CDC25A蛋白表达水平,利用microRNA-503的RNA干扰技术检测不同处理组含药血清对BMECs迁移、增殖、成管能力的影响,在细胞水平上利用实时荧光定量PCR检测脑组织microRNA-503,CCNE1、CDC25A的基因表达水平。 结果:1.与模型组相比,中药治疗组的胆固醇、甘油三酯和血糖水平都有明显的下调(P<0.01);西药治疗组的血糖水平明显下调(P<0.01);2.与模型组相比,中药治疗组和西药治疗组的Bederson评分均显著降低(P<0.01);3.血管免疫荧光显示:与模型组相比,中药治疗组和西药治疗组的脑梗死区域均出现血管新生增多、血管管径增粗,且中药治疗组优于西药治疗组。4.微循环观察仪检测结果显示:与模型组相比,中药治疗组和西药治疗组的脑部血管增粗、血流加快、蛋白渗漏减少,少见白细胞粘附现象,中药治疗组和西药治疗组的血液微循环状态相似;模型组血流速度慢,有蛋白渗漏和白细胞粘附现象;正常对照组没有发现蛋白渗漏和白细胞粘附现象,假手术组有少量的蛋白渗漏和白细胞粘附现象。5.各实验组大鼠脑组织的CCNE1、CDC25A基因及蛋白表达水平由高到低依次为:正常对照组、假手术组、中药治疗组、西药治疗组、模型组。正常对照组显著高于假手术组(P<0.01);中药和西药治疗组均显著高于模型组(P<0.01);6.各实验组大鼠脑组织microRNA-503基因的表达水平由低到高依次是:正常对照组、假手术组、西药治疗组、中药治疗组、模型组,正常对照组显著低于假手术组(P<0.01);中药和西药治疗组均显著低于模型组(P<0.01)。7.不同组别BMECs迁移、增殖、成管能力由高到低依次是:microRNA-503抑制剂加中药治疗组、microRNA-503抑制剂组、中药血清组、空白血清对照组;增殖、迁移、成管能力比较:空白血清对照组BMECs的增殖、迁移、成管能力均显著低于药血清组(P<0.01)。8.各实验组血清BMECs的CCNE1和CDC25A蛋白基因表达量的水平由高到低依次是:中药加microRNA-503抑制剂组、microRNA-503抑制剂组、中药治疗组、空白血清对照组;中药血清组的CCNE1、CDC25A的基因表达显著高于空白血清组(P<0.01)。9.各实验组血清BMECs的microRNA-503的基因表达量水平由低到高依次是:中药加microRNA-503抑制剂组、microRNA-503抑制剂组、中药治疗组、空白血清对照组;中药血清组的microRNA-503的表达量显著低于空白血清组(P<0.01)。 结论:复元醒脑汤可以降低糖尿病脑梗死大鼠血糖、血脂水平,改善神经缺损行为体征评分,促进梗死组织区域的血管新生。其可能的分子机制在于复元醒脑汤促进了细胞周期蛋白E1(Cycline1,CCNE1)和CDC25A(cell division cycle25A,CDC25A)的表达,抑制了microRNA-503的表达水平,间接提高了BMECs的成管、迁移和增殖能力,从而使得受损血管内皮修复功能得到改善,进而促进局部血管的再生和侧支循环的建立。本研究在体内、体外分别评价了复元醒脑汤的治疗效果,并对复元醒脑汤的起效机制进行了探究,阐释了复元醒脑汤的作用机理,进一步揭示糖尿病脑梗死的病理本质。为糖尿病脑梗死脑缺血后血管新生的调控途径提供可靠实验依据,具有广阔的运用前景和重要的科学意义。