【摘 要】
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[目的]用3T3-L1脂肪细胞构建胰岛素抵抗细胞模型,探究脂肪因子Vaspin、Chemerin和Omentin-1的抑制表达在胰岛素抵抗细胞模型中是否对胰岛素受体下游信号分子胰岛素底物受体1/2（IRS-1/2）及信号通路中磷脂酰肌醇-3激酶[PI3K（P85α）]的表达产生影响。[方法]1.将3T3-L1脂肪细胞进行复苏和传代,用成熟脂肪细胞构建胰岛素抵抗的细胞模型。2.对脂肪因子Vaspin
【基金项目】
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昆医联合专项（431985200-2017FE468（-230））；
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[目的]用3T3-L1脂肪细胞构建胰岛素抵抗细胞模型,探究脂肪因子Vaspin、Chemerin和Omentin-1的抑制表达在胰岛素抵抗细胞模型中是否对胰岛素受体下游信号分子胰岛素底物受体1/2（IRS-1/2）及信号通路中磷脂酰肌醇-3激酶[PI3K（P85α）]的表达产生影响。[方法]1.将3T3-L1脂肪细胞进行复苏和传代,用成熟脂肪细胞构建胰岛素抵抗的细胞模型。2.对脂肪因子Vaspin、Chemerin、Omentin-1分别构建四个干扰载体,并将构建的干扰载体转染至3T3-L1脂肪细胞进行筛选,用Q-PCR和Western Blot选出分别对Vaspin、Chemerin、Omentin-1干扰最佳的干扰载体。3.将干扰最佳的干扰载体利用大肠杆菌表达系统进行质粒转化、扩大培养和提取。4.提取的干扰质粒分别以三个抑制表达浓度（1.0μg、2.5μg、5.0μg）转染至构建的胰岛素抵抗细胞模型中（每个浓度转染6孔,3系共18个数据）,无转染的细胞作为对照组。5.Q-PCR检测细胞中的 Vaspin、Chemerin、Omentin-1、IRS-1、IRS-2、PI3K（P85α）的 mRNA表达。统计分析时各系用0.0μg浓度组均值作为标准,其他三组用相应比值X±S进行标化和量化,SPSS 25.0软件统计分析,GraphPad 9.0软件作图。[结果]1.在构建胰岛素抵抗的细胞模型过程中,相比正常对照组,模型组培养基中残余葡萄糖量增多,说明构建的胰岛素抵抗模型是成功的。2.Q-PCR 和 Western Blot 筛选 Vaspin、Chemerin、Omentin-1 这 3 个基因的最佳干扰载体分别为:Vaspin干扰载体2、Chemerin干扰载体1、Omentin-1干扰载体3。3.筛选出的各干扰载体随着浓度的增加,Vaspin、Chemerin、Omentin-1的基因表达量逐渐下降且均有显著性差异（P＜0.05）,说明构建的干扰载体有效。4.随着Vaspin干扰载体浓度的增加,Vaspin的mRNA表达下降且有显著性差异（P＜0.05）,而IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α）的mRNA表达没有发生改变且无显著性差异（P＞0.05）。5.随着Chemerin干扰载体浓度的增加,Chemerin的mRNA表达下降且有显著性差异（P＜0.05）,而IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α）的mRNA表达没有发生改变,且均无显著性差异（P＞0.05）。6.随着Omentin-1干扰载体浓度的增加,Omentin-1的mRNA表达下降且有显著性差异（P＜0.05）,IRS-1的mRNA表达持续下降且有显著性差异（P＜0.05）、IRS-2的mRNA表达没有发生明显改变且无显著性差异（P=0.068）,PI3K（P85α）的mRNA表达持续下降且有显著性差异（P＜0.05）。[结论]1.Vaspin抑制表达,可能减弱了它对胰岛素的增敏作用,IRS-1、IRS-2和PI3K（P85a）信号通路不能被激活,也有可能与IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α）的信号通路没有相关性,是由其他信号通路激活引起。2.Chemerin的抑制表达与IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α）的mRNA表达没有相关性,Chemerin介导的胰岛素抵抗可能并不是由IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α）信号通路引起。3.Omentin-1的抑制表达与IRS-1和PI3K（P85α）的mRNA表达下降显著相关,与IRS-2的mRNA表达没有相关性。Omentin-1作为一种具有保护特性的脂肪因子,在胰岛素增敏作用中可能是与IRS-1和PI3K（P85α）信号通路的激活有关,而与IRS-2的激活可能没有相关性。
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