[背景]发热是儿科疾病最常见的症状之一,及时采取有效的降温干预非常关键。小儿推拿治疗发热历史悠久,其安全性和有效性已经确立。但小儿推拿的研究仍处于初级阶段,基础研究较少,发热动物模型多样、标准不统一,不利于小儿推拿退热机制的揭示,更不利于小儿推拿临床应用的推广和发展。[目的]研究旨在探究适宜小儿推拿退热研究的动物模型,阐明推拿退热六法的退热效果及对环氧化酶 2（cyclooxygenase-2,COX-2）/前列腺素 E2（prostaglandin E2,PGE2）/E-前列腺素类激素3（EP3）受体通路的影响,为临床小儿推拿退热提供科学支撑。通过对比不同致热幼兔模型肛温变化特点,明确适宜小儿推拿退热研究的幼兔发热模型。通过退热效果观察,评价退热六法对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致热幼兔的疗效;通过酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa）、蛋白免疫印迹法（western-blot,WB）、逆转录聚合酶链式反应法（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测外周、中枢COX-2/PGE2/EP3信号通路相关指标表达,明确小儿推拿治疗发热的分子机制。[方法]研究分为两组:实验一研究两种幼兔发热模型肛温变化特点;实验二研究退热六法对LPS致热幼兔的退热效果及对COX-2/PGE2/EP3通路的影响。实验一:两种幼兔发热模型肛温变化特点的研究①分组:将30只按实验标准严格筛选的二月龄雄性新西兰幼兔随机分为正常组、10%干酵母组、20%干酵母组、0.2μg/kg LPS组、0.5 μg/kg LPS组,每组各6只。②造模方法:干酵母组幼兔颈后平2胸椎处皮下注射10%、20%干酵母混悬液5mL/kg。LPS组幼兔耳缘静脉注射0.2μg/mL、0.5μg/mL的LPS溶液1 mL/kg。③肛温监测:干酵母组注射后 1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、24h、25h、26h 分别记录一次肛温。LPS组注射后每20 min记录一次肛温至肛温恢复正常或360 min。④分析:每组不同时间点平均肛温值,并绘制平均肛温反应曲线,计算各时间点肛温变化值（ΔT）,最大肛温变化值（ΔTmax）、ΔTmax出现时间、发热潜伏期、发热持续时间。以及发热过程中幼兔的心率、喘息、流涕、大便情况实验二:退热六法对LPS致热幼兔退热效果及对COX-2/PGE2/EP3通路影响的研究①分组:将24只按实验标准严格筛选的二月龄雄性新西兰幼兔随机分为盐水组、模型组、推拿组,每组各8只。②造模方法:盐水组幼兔自然清醒状态下,经耳缘静脉注射生理盐水1 mL/Kg。模型组和推拿组幼兔经耳缘静脉注射0.5 μg/mL的LPS 1 mL/Kg。③干预:盐水组、模型组在与推拿组相同位置处涂抹等量室温清水。推拿组造模后60 min进行退热六法干预:开天门2 min、推坎宫2 min、揉太阳2 min、揉耳后高骨2 min、清天河水5 min、推脊5 min。④肛温监测:使用ZRY-2D智能热原仪于造模后每20 min连续监测肛温至造模后180 min。⑤取材:造模后180 min取静脉血、肝、肺、下丘脑。⑥疗效评价:计算每组各时间点ΔT和体反应指数（thermal response index,TRI）。⑦机制探究:外周:Elisa、WB检测外周血浆、肝、肺PGE2、COX-2表达水平。中枢:Elisa、WB、RT-PCR检测中枢下丘脑PGE2、COX-2、EP3、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）表达水平,阐明退热六法对 COX-2/PGE2/EP3 通路的影响,从分子水平说明小儿推拿的退热机制。[结果]实验一:两种幼兔发热模型肛温变化特点的研究1 干酵母致热模型幼兔肛温变化特点:①肛温变化:注射干酵母后,肛温先下降,随后逐渐回升,约2 h后恢复至基础肛温水平。2～4h开始大幅升温,4h后升势稍减弱,直至上升至最高值,微下降后可维持高温至造模后26 h。②ΔT:与正常组比较,10%干酵母组4 h、6 h、8 h、24 h、26 h的ΔT增大（P＜0.05）。与正常组比较,20%干酵母组4 h、6 h、8 h、24 h、26 h肛温变化值增大（P＜0.01）。③10%、20%干酵母组幼兔最大降温值均出现在注射后1h,差异无统计学意义（P＞0.05）。③发热潜伏期:约4 h,且发热潜伏期与浓度无明显关系,10%、20%干酵母组幼兔发热潜伏期无差异（P＞0.05）。④ΔTmax:10%干酵母组ΔTmax出现在注射后6h,约2℃,20%干酵母组ΔTmax出现在注射后8 h,约2.88℃。与10%干酵母组ΔTmax比较,20%干酵母组ΔTmax增大（P＜0.05）。⑥发热持续时间:10%、20%干酵母组幼兔均可维持发热至少20 h。2 干酵母致热模型幼兔一般状态:干酵母注射后局部出现硬结、肿胀。注射时可见幼兔出现明显的烦躁表现。随肛温升高,精神逐渐萎靡,心率加快,呼吸明显加快、变浅,可闻及粗大喘息声,头面、耳廓发烫明显,耳部血管充盈。3 LPS致热模型幼兔肛温变化特点:①肛温变化:0.2 μg/kg LPS组幼兔肛温呈双相热曲线,最高温出现在肛温曲线第一峰。0.5 μg/kg LPS组呈明显三相热曲线,最高温出现在肛温曲线第二峰。②ΔT:与正常组比较,0.2 μg/kg LPS组60 min、120 min、180 min 的ΔT 增大（P＜0.05）。与正常组比较,0.5 μg/kg LPS 组 60 min、120 min、180 min、240 min的ΔT增大（P＜0.05）。③发热潜伏期:0.2 μg/kg LPS组与0.5 μg/kg LPS组发热潜伏期无差异（P＞0.05）。④ΔTmax:0.2μg/kg LPS组幼兔ΔTmax出现在注射后103 min,0.5μg/kg LPS组ΔTmax出现在注射后168 min,两组ΔTmax差异无统计学意义（P＞0.05）,两组ΔTmax出现时间的差异有统计学意义（P＜0.05）。⑤发热持续时间:0.2 μg/kg LPS组可持续约190 min,0.5 μg/kg LPS组发热可持续约246 min,差异有统计学意义（P＜0.05）。4 LPS致热模型幼兔一般状态:0.2 μg/kg LPS组致热过程中幼兔腹泻症状较轻,偶可见少量清稀白涕。0.5 μg/kg LPS组,注射后幼兔出现精神不振,随肛温的升高,出现呼吸、心率加快,喘息声粗大、流白色浊涕、水样便等表现。实验二:退热六法对LPS致热幼兔的退热效果及对COX-2/PGE2/EP3通路影响的研究1 疗效评价:①ΔT:造模后60 min,与盐水组比较,模型组、推拿组幼兔ΔT增大（P＜0.05）;与模型组比较,推拿组幼兔（干预前）的ΔT无差异（P＞0.05）。造模后180 min,与盐水组比较,模型组ΔT增大（P＜0.05）;与模型组比较,推拿组ΔT减小（P＜0.01）。②TRI:造模后60min,与盐水组比较,模型组、推拿组幼兔TRI增大（P＜0.01）;与模型组比较,推拿组幼兔（干预前）TRI无差异（P＞0.05）。造模后180 min,与盐水组比较,模型组TRI增大（P＜0.05）;与模型组比较,推拿组TRI 减小（P＜0.01）。2 外周机制:①血浆中PGE2:Elisa检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔血浆中的PGE2表达量增加（P＜0.01）。退热六法干预后,与模型组比较,推拿组PGE2表达量减少（P＜0.01）。②肝、肺组织中PGE2:Elisa检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔肝、肺组织中PGE2表达量均增加（P＜0.01）。退热六法干预后,与模型组比较,推拿组幼兔组织中PGE2表达量均减少（P＜0.01）。③肝、肺组织中COX-2:WB检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔肝、肺组织中COX-2表达量增加（P＜0.01）。与模型组比较,推拿组幼兔肝、肺组织中COX-2表达量减少（P＜0.05）。3 中枢机制:①下丘脑中PGE2、cAMP:Elisa检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔下丘脑中PGE2表达量增加（P＜0.01）。退热六法干预后,与模型组比较,推拿组幼兔下丘脑中PGE2表达量减少（P＜0.05）。②下丘脑中COX-2、EP3、cAMP:WB检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔下丘脑中COX-2、EP3、cAMP表达量增加（P＜0.01）。与模型组比较,推拿组幼兔下丘脑中COX-2、EP3、cAMP表达量减少（P＜0.05）。③下丘脑中 COX-2 mRNA、EP3 mRNA、cAMP mRNA:RT-PCR 检测结果显示,与盐水组比较,模型组幼兔下丘脑中COX-2 mRNA、EP3 mRNA、cAMP mRNA表达量增加（P＜0.01）。与模型组比较,推拿组幼兔下丘脑中COX-2 mRNA、EP3 mRNA、cAMP mRNA表达量减少（P＜0.01）。[结论]1 干酵母致热是高热、长时发热模型,发热时程长,发热初期存在短时温度下降现象。升温过程持久,升温幅度与注射的浓度相关。LPS致热幼兔模型发热时程较干酵母模型短,发热趋势呈多相。随浓度增大,发热持续时间延长,模型更稳定。LPS致热过程贴近临床小儿外感发热的特点,更适合小儿推拿治疗发热的基础研究。2 退热六法可降低LPS致热幼兔的肛温、ΔT、TRI,减轻发热程度。3 退热六法可通过COX-2/PGE2/EP3通路,抑制LPS致热幼兔外周、中枢体温调节介质PGE2、cAMP表达,发挥退热作用。