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奶牛乳腺炎是奶牛的常见病和多发病,是造成奶牛业损失最为严重的疾病之一。葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌是引起奶牛乳腺炎的重要致病因素。随着抗菌药物在世界范围内的大量使用及滥用,细菌逐渐产生耐药甚至多重耐药。本试验对奶牛乳腺炎分离菌进行药物敏感性试验及病原分子流行病学研究,以期掌握牛源乳腺炎病原菌的耐药特征,旨在对奶牛乳腺炎的防治提供理论依据。本试验采用纸片扩散法对38株葡萄球菌（19株金黄色葡萄球菌,9株表皮葡萄球菌,8株产色葡萄球菌,1株溶血性葡萄球菌,1株猪葡萄球菌）进行药敏试验,结果显示金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素和环丙沙星耐药,耐药率分别为94.74%、84.21%、84.21%,对头孢类、克林霉素、苯唑西林和多西环素敏感。凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素、红霉素等7种药物均耐药,对头孢西丁、苯唑西林这2种药物敏感。利用聚合酶链反应（PCR）,检测38株葡萄球菌中耐红霉素基因erm A、erm B、erm C、耐青霉素基因mec A。结果显示:erm A、erm B、erm C、mec A基因的阳性率分别为2.63%、7.89%、13.16%、7.89%。其中2株表皮葡萄球菌同时携带erm C和mec A两种耐药基因,1株溶血性葡萄球菌同时携带erm B和mec A两种耐药基因。利用琼脂稀释法从38株葡萄球菌中分离出1株耐氟苯尼考的表皮葡萄球菌,通过PCR技术检测出其同时携带mec A、fex A。对乳腺炎奶样中分离出来的链球菌进行药物敏感性试验和耐药基因检测。结果表明,所采集143个样本中分离出12株链球菌,其中包括5株乳房链球菌,6株无乳链球菌,1株停乳链球菌。通过药敏试验表明,链球菌对氟苯尼考以及头孢噻呋敏感,对克林霉素以及红霉素耐药,并通过PCR检测到4株乳房链球菌携带耐红霉素基因erm B,,3株停乳链球菌携带耐红霉素基因erm C,。采用微量肉汤稀释法分别对乳腺炎奶样和健康奶样分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验,结果显示牛源大肠杆菌对抗生素药物呈现不同程度的耐药性,但乳腺炎奶样分离的大肠杆菌耐药性明显高于健康奶样中分离的大肠杆菌。经PCR扩增、测序分型后,从乳腺炎奶样分离的36株大肠杆菌中筛选出10株菌携带blaCTX-M基因,1株菌携带blacmy-2基因。通过质粒不相容检测和接合转移试验对分离菌株进行耐药质粒的分析,结果显示2株携带blaCTX-M大肠杆菌可通过接合将耐药质粒转入受体菌大肠杆菌C600,引起blaCTX-M基因在菌株间水平传播。对10株携带bla CTXM基因的牛源大肠杆菌进行种系发育分型,结果显示10株分离株中有两株属于D群,其余属于A或B1群。通过多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）技术对携带blaCTX-M的大肠杆菌进行分型,并使用e BURST v3和MEGA 6软件分析各菌株ST型间的进化关系。结果表明10株牛源大肠杆菌属于ST的类型达到7个,属于ST648的B4-1、B9-1和属于ST1613的M10、M11、M8有着较近的亲缘关系,其余则比较分散。对健康奶样分离的76株大肠杆菌中筛选出8株菌携带blaCTX-M基因的大肠杆菌进行种系发育分型和多位点序列分型,结果显示8株大肠杆菌均属于无致病性的B1群,ST分型达到5种,其中2株的分型与目前公布的ST型不一致,需要进一步提交命名。综上,从奶牛乳腺炎样品中检测到的病原主要是葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌。葡萄球菌耐药并不严重,erm A、erm B、erm C、mec A基因的阳性率分别为2.63%、7.89%、13.16%、7.89%,其中1株表皮葡萄球菌同时携带mec A、fex A耐药基因。链球菌耐药也不严重,12株中只检测到了7株携带耐红霉素基因。奶牛乳腺炎分离的大肠杆菌耐药严重。10株大肠杆菌携带blaCTX-M基因,1株菌携带blacmy-2基因,属于7个ST类型,其中2株携带的耐药质粒可以通过接合而水平传递。临床治疗奶牛乳腺炎时,应科学合理使用药物,避免或减少细菌耐药性的产生,促进奶牛养殖的健康发展。