牙骨质再生是牙周组织工程学中的一个重要而又具有挑战性的环节。牙骨质作为牙周组织的组成部分,对于维持牙周组织健康具有重要意义。对牙骨质形成的研究将有助于认识牙周组织疾病的发生发展,也将为其治疗与修复提供新的思路。核转录因子7类似物2（Tcf712）作为Wnt信号通路的关键调节分子,在多种组织器官的发育和再生过程中具有重要调控作用。NF-κB信号通路调控超过150个靶基因,与Wnt通路具有千丝万缕的联系。然而Tcf712与NF-κB信号通路是否存在相互作用,是否以及如何调控牙骨质形成,目前尚未得到明确研究。目的:本研究旨在探究Tcf712和NF-κB信号通路调控牙骨质形成过程的分子作用机制,为牙周炎的治疗和牙周组织再生提供新的理论基础。本研究分为以下两部分进行:第一部分:Tcf712对牙骨质形成过程的调控作用。第二部分:NF-κB信号通路介导Tcf712对牙骨质形成的调控作用。材料与方法:第一部分:Tcf712对牙骨质形成过程的调控作用。体外实验:体外培养成牙骨质细胞系OCCM-30,分为两组:1)shTcf712组:OCCM-30转染Tcf712沉默质粒作为实验组;2)scrambled组:OCCM-30转染无序质粒作为对照组。首先检测细胞转染效率。然后将两组细胞进行矿化诱导培养,于矿化培养第1天、第4天、第7天、第14天使用RtPCR进行矿化相关基因（Alp、fBsp、Runx2）检测;于矿化培养第14天进行ALP活性染色;矿化培养第21天进行茜素红染色。体内动物实验:1.牙骨质发育过程中Tcf712表达检测实验:实验动物均选取野生型C57BL6小鼠（Wild-Type,WT）分为4年龄梯度:1周龄、2周龄、3周龄、4周龄,取其下颌骨磨牙区标本进行H＆E染色和免疫组化检测Tcf712。2.缺失Tcf712对牙骨质形成影响实验:实验动物分为两组,8周龄全身Tcf712条件性缺失小鼠（Tcf712-CKO）（2周龄敲除基因）和其8周龄同窝对照小鼠（对照组,Con）。取其下颌骨磨牙区标本进行H＆E和甲苯胺蓝染色检测牙骨质厚度。第二部分:NF-κB信号通路介导Tcf712对牙骨质形成的调控作用。体外实验1.沉默Tcf712对NF-κB信号通路激活的影响。将OCCM-30分为两组:shTcf712组和scrambled组。于矿化诱导第14天免疫荧光检测两组p65入核情况,Western Blot检测p-p65蛋白水平表达。2.阻断NF-κB信号通路对矿化和Tcf712的影响。将OCCM-30分为两组:对照组:矿化培养液中添加等量PBS;NF-κB阻断组:矿化培养液中含有10μMNF-κB阻断剂PDTC。矿化第14天使用ALP活性染色检测两组细胞矿化结节形成;RtPCR检测矿化相关基因表达;Western Blot检测Tcf712 表达。体内动物实验:体内检测Tcf712缺失对NF-κB信号通路的影响。实验动物分为两组:1)8周龄对照组小鼠;2)8周龄Tcf712-CKO小鼠（8周龄敲除基因）。取其下颌骨磨牙区标本进行免疫组化检测Tcf712和p-p65表达。结果:第一部分:Tcf712对牙骨质形成过程的调控作用。体外实验:免疫荧光结果显示荧光质粒成功转染至OCCM-30细胞内。Western Blot和RtPCR检测结果显示,shTcf712组中Tcf712的蛋白和基因表达均低于scrambled组。沉默Tcf712对OCCM-30矿化程度影响:ALP结果显示:矿化第14天shTcf712组阳性结节显著低于scrambled组。茜素红染色结果显示:矿化第21天shTcf712组阳性结节显著低于scrambled组。RtPCR检测结果显示,矿化第14天shTcf712组中矿化相关基因（Alp、Bsp、Runx2）表达均低于scrambled组。体内动物实验:①牙骨质发育过程中Tcf712表达结果:H＆E染色结果显示,1周龄小鼠磨牙上皮隔形成,牙根开始发育,4周龄小鼠根尖部出现收缩,牙根发育接近完全。免疫组化结果显示:Tcf712在发育过程中的牙骨质区域存在表达。②缺失Tcf712对牙骨质形成影响:H＆E和甲苯胺蓝染色结果显示,8周龄Tcf712-CKO小鼠牙骨质厚度显著低于对照组小鼠。第二部分:NF-κB信号通路介导Tcf712对牙骨质形成的调控作用。体外实验:1.免疫荧光结果显示,shTcf712组核内p65荧光强度显著低于scrambled组;Western Blot结果显示,shTcf712组p-p65蛋白水平表达显著低于scrambled组2.ALP染色结果显示:矿化第14天对照组ALP阳性矿化结节显著高于NF-κB阻断组;RtPCR检测结果显示,矿化第14天对照组矿化相关基因（Alp、Opn、Osx）表达显著高于NF-κB阻断组;Western Blot检测结果显示,矿化第14天对照组与NF-κB阻断组Tcf712表达无明显差异。体内动物实验:免疫组化结果显示,8周龄Tcf712-CKO小鼠下颌磨牙区Tcf712和p-p65表达显著低于8周龄对照组小鼠。结论:转录因子Tcf712在生长发育过程中,通过激活NF-κB信号通路,正向调控小鼠牙骨质形成。本研究揭示了一种新的信号转导途径,Tcf712参与牙骨质的形成和发育,进一步丰富了 NF-κB信号通路在非炎症环境中的作用机制,为牙周组织工程提供了新的视野。