【摘 要】
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研究背景:肺癌的发生率和死亡率均位恶性肿瘤之首,传统的肺癌诊断方法如螺旋CT、PET-CT、血清肿瘤标记物、病理活检等无法同时具备高灵敏、高特异、微创的实现对肺癌诊断及疗效监测。肿瘤教育的血小板（tumor educated platelet,TEPs）,被认为是一种有前景的液体活检材料,其已经在肺癌的早期诊断及鉴别诊断研究中展示出了可喜的成果,如能发现其可被运用于肺癌疗效监测,将具有重大的临床价
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研究背景:肺癌的发生率和死亡率均位恶性肿瘤之首,传统的肺癌诊断方法如螺旋CT、PET-CT、血清肿瘤标记物、病理活检等无法同时具备高灵敏、高特异、微创的实现对肺癌诊断及疗效监测。肿瘤教育的血小板（tumor educated platelet,TEPs）,被认为是一种有前景的液体活检材料,其已经在肺癌的早期诊断及鉴别诊断研究中展示出了可喜的成果,如能发现其可被运用于肺癌疗效监测,将具有重大的临床价值。研究目的:运用二代测序（the next generation sequencing,NGS）技术及生物信息学分析比较肺癌患者治疗前后外周血中血小板mRNA谱的表达差异;探讨其作为生物标记物在肺癌治疗疗效监测方面的潜在应用价值;找寻并鉴定可能被用于后续实验的评估肺癌治疗疗效的TEPs mRNA谱组合。研究方法:收集未行抗肿瘤治疗的非小细胞肺癌患者10例,收集经手术联合术后辅助化疗实现影像学层面治愈后的非小细胞肺癌患者5例,运用二代测序得到各样本血小板mRNA基因谱组合,运用统计学方法对基因进行差异mRNA表达分析,并对差异表达基因进行聚类分析及功能注释,选取差异表达最大并且均一性最好的基因,将这些基因与NCBI基因库、pubmed外文数据库及中文数据库进行比对验证。结果:通过对肺癌治疗前与治疗后组血小板mRNA测序结果进行比较,找到差异表达基因315个,其中215个在肺癌治疗后组中上调,100个在肺癌治疗后组中下调。Gene Ontology功能分析提示差异表达基因在生物过程上主要与信号转导（signal transduction）、免疫系统过程（immune system process）、细胞黏附（cell adhesion）有关,在细胞成分上主要与细胞膜（membrane）、细胞质（cytoplasm）、细胞核（nucleus）有关,在分子功能上主要与蛋白结合（proteinbinding）、金属离子结合（metalion binding）、转移酶活性（transterase activity）等有关。KEGG通路富集分析发现,差异表达的基因主要与癌症中的胆碱代谢（Cholinemetabolism in cancer）、EGFR 酪氨酸激酶抑制剂耐药（EGFR tyrosine kinase inhibitor resistance）、肌动蛋白细胞骨架的调节相关（Regulation of actin cytoskeleton）、癌症中的转录失调（Transcriptional misregulation in cancer）等有关。选取差异性最大且组内均一性最好的19个目标基因,查找既往文献发现其中15个与肺癌有关,且这些基因在本次研究中的变化趋势与既往其他研究中的变化趋势一致。结论:肺癌治疗前后患者血小板内的mRNA的基因表达谱存在明显差异,且这些明显差异表达的基因中大部分与肿瘤发生发展有关,通过查阅文献显示部分基因参与到肺癌的发生发展,变化趋势与已有报道的其他研究中表现一致,提示肿瘤教育血小板RNA谱在肺癌治疗前后产生变化。进一步启示了肿瘤教育血小板在肺癌治疗疗效评估中潜在的应用价值。
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