岭南山竹子果皮提取物对溃疡性结肠炎的治疗作用及化学成分研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanggh1963
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岭南山竹子(Garcinia oblongifolia Champ.ex Benth)为藤黄科(Guttiferae)藤黄属植物,主要分布在广西、广东、海南等地,其果实、树皮、树叶均可作为药材,主治消炎止痛,收敛生肌,内服可用于肠炎、小儿消化不良、胃溃疡、十二指肠溃疡、泄泻、呕吐、口腔炎、牙周炎、痈疮溃烂;外用于烧烫伤、下肢溃疡、湿疹。溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种原因不明的非特异性结肠慢性炎症,是炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)的一种,常反复发作,迁延不愈,病变主要牵连结直肠,主要临床症状有腹痛、腹泻和粘液血便等。临床上常用氨基水杨酸类、糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗UC,但效果不显著且常伴不良反应发生,因此寻找其他安全有效的药物仍是十分必要。目的:探索岭南山竹子70%乙醇提物(Garcinia oblongifolia ethanol extract,GOEE)的安全性和其对UC是否有治疗作用,并对岭南山竹子果皮的成分进行研究,为岭南山竹子安全应用于UC和进一步研究提供实验数据。方法:使用课题组前期提取的岭南山竹子醇提物一次性灌胃给药,观察小鼠的毒性反应和器官脏器改变,测试其半数致死量(Median lethal dose,LD50)值,评价岭南山竹子的安全性。建立3%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)诱导C57BL/C小鼠UC模型,将小鼠随机分为正常组、DSS模型组、美沙拉嗪组、GOEE(200、400、800 mg/kg),观察小鼠体重变化、结肠长度、疾病活动指数(Disease activity index,DAI)和结肠HE染色病理学改变;检测小鼠血清和结肠中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(L-10)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活力。对GOEE进行分离,岭南山竹子醇提物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位的抗炎活性较好,因此对这两部分采用多个溶剂系统,通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱,聚酰胺柱色谱、ODS柱色谱等进行化学成分分离,对所得化合物使用理化性质,1D-NMR,HSQC,HMBC,MS,IR,UV等现代波谱技术及参考文献数据对照进行结构鉴定。通过化合物抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生,计算化合物抑制NO的IC50,评价化合物的抗炎活性。结果:一次性灌胃毒性试验GOEE的LD50=7.16 g/kg,部分小鼠出现的毒性反应均可逆,一次性灌胃毒性观察中没有发现明显的器官变化。此外,GOEE能显著抑制UC小鼠的体重下降、结肠缩短,改善DAI及结肠组织病理评分,减少小鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量,升高IL-4、IL-10的水平,并且GOEE能降低结肠MPO、MDA的含量,提高SOD、GSH-px酶的活性,对UC小鼠具有很好改善作用。从正丁醇部位和乙酸乙酯部位分离纯化并鉴定得到6个化合物,经过现代波谱技术鉴定,分别为柠檬酸三丁酯(1)、2-(butoxycarbonylmethyl)-3-butoxycarbo nyl-2-hydroxy-3-propanolide(2)、羟基柠檬酸三丁酯(3)、guttiferone I(4)、Oblongifolins A(5)、Oblongifolins B(6)。其中化合物(3)为新化合物,化合物1-4为该植物首次分离得到。化合物(2)的IC50为7.79±3.31μM和化合物(5)的IC50为8.39±2.17μM,展现良好的抗炎活性,化合物(3)无明显的抗炎活性,化合物(4)和化合物(6)在大于30μM的时候具有明显的毒性,化合物(1)的IC50为16.71±2.54μM,化合物GOL-10的IC50为27.03±7.36μM。结论:通过GOEE的急性毒性考察,发现GOEE安全低毒,并且发现GOEE能明显改善DSS诱导的UC小鼠的结肠长度、疾病活动指数和结肠组织病理评分等。并通过对正丁醇部位和乙酸乙酯部位分离鉴定,得到3个苯甲酮类化合物、3个柠檬酸衍生物,进一步对化合物进行体外抗炎活性的研究,发现化合物(2)的IC50为7.79±3.31μM和化合物(5)的IC50为8.39±2.17μM,展现较好的抗炎活性。
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