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目的1.观察二仙赞育方治疗弱精子症的临床疗效和安全性,提供补肾健脾祛瘀化浊法改善弱精子症临床疗效的循证医学证据。2.探究二仙赞育方治疗弱精子症的作用机理,即二仙赞育方是否是调整Bcl-2/Bax-Caspase9-Caspase3通路,减少该通路导致的精子细胞凋亡,进而治疗弱精子症的,为补肾健脾祛瘀化浊法治疗弱精子症提供实验数据依据。方法1.临床研究:将72例符合纳入标准的弱精子症患者随机分为对照组和治疗组,每组36人,对照组采用左卡尼汀口服液治疗3个月,治疗组采用二仙赞育方治疗3个月,通过检测精子浓度、PR级精子、（PR+NP）级精子、精液量、中医证候评分、受孕率、安全性指标等进行临床数据收集。2.实验研究:通过单纯随机抽样方法将24只雄性SD大鼠分成为:空白组、模型组、低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组、左卡尼汀口服液对照组6组,每组各4只,观察二仙赞育方对弱精子症模型大鼠精子的质量变化、睾丸附睾电镜结构、线粒体活性、基因的转录和蛋白的表达等的作用改变。结果1临床研究本研究共纳入72名受试者,对照组36例,治疗组36例。研究期间,对照组自愿退出8例,治疗组因未完成随访脱落2例,最终以对照组28例,治疗组34例,共计62例被纳入统计;所有病例未出现不良反应事件。具体结果如下:1.1主要疗效指标分析1.1.1精子活动力前向运动精子（PR）及精子总活力（PR+NP）两组治疗后均与明显提升（P＜0.01）;相较于对照组,治疗组疗效较好（P＜0.05）。1.2次要疗效指标分析1.2.1精液量治疗后精液量两组均有提升（P＜0.05）,治疗组提升优于对照组（P＜0.05）。1.2.2精子浓度对照组内治疗后精子浓度变化明显（P＜0.05）,治疗组内治疗后变化显著（P＜0.01）。治疗后治疗组精子浓度提升优于对照组（P＜0.05）。1.2.3中医相关指标评分对照组的中医证候总评分治疗前后比较无统计学意义（P＞0.05）;治疗组的中医证候总评分治疗后得到显著改善（P＜0.01）。治疗组对于腰膝酸软、畏寒肢冷、精神萎靡、面色晄白、性欲冷淡、健忘、会阴/小腹刺痛、大便溏稀等八类症状治疗效果显著（P＜0.01）;在治疗小便清长、食欲不振等两类症状上治疗组有明显效果（P＜0.05）;对照组在这些症状评分上治疗后与治疗前比较无统计学意义（P＞0.05）。1.3临床疗效结果对照组总有效率为71.4%,治疗组总有效率为88.2%,治疗组的治疗效果优于对照组（P＜0.01）。1.4安全性观察对照组及治疗组的受试者受试期间均未出现不良反应,治疗结束后复查血常规、尿常规及肝肾功能未见明显异常。2实验研究2.1电镜下大鼠睾丸附睾组织形态学空白组:线粒体未见肿胀;模型组:线粒体水肿、断裂;二仙赞育方低剂量组:线粒体、内质网肿胀;二仙赞育方中剂量组:线粒体较正常;二仙赞育方高剂量组:线粒体、内质网无肿胀;左卡尼汀组:线粒体较正常。2.2大鼠精子浓度及活力与空白组比较,模型组大鼠有活力精子数明显下降（P＜0.05）,表明弱精子症大鼠造模成功;与模型组比较,二仙赞育方低剂量组、中剂量组、高剂量组及左卡尼汀组大鼠精子浓度均有明显改善（P＜0.05）;与模型组相比,二仙赞育方低剂量组、中剂量组、高剂量组及左卡尼汀组大鼠精子存活率均明显提高（P＜0.05）。2.3大鼠睾丸组织ROS水平影响用DHE染色评估睾丸组织ROS水平,奥硝唑会加重氧化损伤,并增强睾丸组织细胞中的荧光表达,二仙赞育方及左卡尼汀能减弱大鼠睾丸组织细胞的荧光表达。2.4 大鼠睾丸组织 Bcl-2、Bax、caspase3、caspase9 mRNA 表达与空白组相比,模型组大鼠生精细胞Bcl-2 mRNA表达升高（P＜0.05）;二仙赞育方低剂量组、中剂量组、高剂量组及左卡尼汀组较模型组降低（P＜0.05）。与空白组比较,模型组大鼠生精细胞Bax、caspase3、caspase9 mRNA表达水平降低（P＜0.05）;二仙赞育方低剂量组、中剂量组、高剂量组及左卡尼汀组较模型组升高（P＜0.05）。2.5大鼠睾丸组织Bcl-2、Bax、cytc、caspase3、caspase9蛋白表达情况与空白组比较,模型组大鼠Bcl-2表达水平增高（P＜0.05）;Bax、cytc、caspase3、caspase9表达水平降低（P＜0.05）。与模型组比较,二仙赞育方各组及左卡尼汀组Bcl-2表达水平降低（P＜0.05）;Bax、cytc、caspase3、caspase9 表达水平均增高（P＜0.05）。结论1.临床研究通过对入组病例进行不同的治疗方法对照观察,验证二仙赞育方对改善精液量、精子浓度、精子活动力等方面具有明显疗效且服用安全。1.1二仙赞育方能够有效增加精子活动力,同时提高精子浓度,增加精液量;1.2二仙赞育方能够有效降低弱精子症患者的中医证候评分,改善患者临床综合症状疗效显著;1.3二仙赞育方治疗弱精子症患者安全性高。2.实验研究通过ORN灌胃造模,技术成熟,可导致睾丸附睾损伤,引起大鼠精子活动力下降。2.1二仙赞育方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活动力,初步验证了二仙赞育方治疗弱精子症的有效性;2.2二仙赞育方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达,上调Bax、caspase3、Caspase9 mRNA及蛋白表达,提示二仙赞育方通过诱导Bax和Bcl-2改变,激活Caspase 9-Caspase 3通路,进而改善精液质量。