目的:在前期当归补血汤抗肝纤维化抑制血管新生取效的基础上，针对肝纤维化血管新生病理，通过拆方研究，阐明该方抗肝纤维化的配伍特点;进一步筛选活性成分及体外毒、效范围;通过星点设计进行活性成分组分配伍组方，并进行体内外验证。　　方法:本论文分为四个部分。　　1、当归补血汤及其拆方影响肝脏血管新生的抗肝纤维体内研究。雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、索拉非尼组、当归补血汤组、黄芪组、当归组。CCl4复合高脂低蛋白饮食诱导大鼠肝纤维化模型。自造模第2周开始给药，每天1次，共4周。实验结束观察大鼠一般情况，包括生存率、体重、肝体比、脾体比变化;检测血清肝功能包括ALT、AST、Alb水平;HE及天狼猩红染色观察肝组织炎症及胶原沉积，肝组织羟脯氨酸含量、肝组织Ⅰ型胶原和α-SMA表达观察肝纤维化情况;同步辐射二维成像、扫描电镜观察肝窦窗孔、免疫荧光及蛋白印迹法检测肝组织CD31、vWF、VEGF、VEGFR2、ERK、p-ERK蛋白表达以评价肝脏血管。　　2、当归补血汤抗肝纤维化活性成分筛选。CCK8法筛选当归补血汤9种药物成分作用于SK-HEP-1、LX-2、HL-7702细胞株的最大无毒浓度;TGF-β1诱导LX-2构建星状细胞活化模型，ECGs诱导SK-HEP-1构建内皮细胞增殖模型，H2O2诱导HL-7702构建肝细胞损伤模型，分为空白对照组、模型组、当归补血汤成分组、阳性药物组，无血清培养液饥饿24 h后，各药物成分与诱导药物同时孵育48 h。CCK8法检测药物对细胞毒性及增殖影响，根据剂量反应函数拟合曲线计算药物成分的IC50。　　3、当归补血汤组分配伍抗肝纤维化活性评价。细胞水平:根据第二部分结果并结合课题组前期与血管新生相关结果，筛选出黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮、欧当归内酯A进行组分配伍，分为空白对照组、模型组、组分配伍组、阳性药物组，细胞模型及处理方法同第二部分。CCK8法分析细胞增殖及毒性，星点设计效应面法分析3成分之间最佳配伍的浓度，Chou-Talalay联合指数法分析3成分之间的协同作用。高内涵检测LX-2中α-SMA表达。转基因斑马鱼血管新生模型评价组分配伍抑制血管的作用。　　4、当归补血汤组分配伍抗肝纤维的体内验证。C57/BLC小鼠随机分为正常组、正常加配伍高剂量组、模型组、索拉菲尼组、欧当归内酯A组、配伍高剂量组、配伍低剂量组，采用DMN诱导肝纤维化模型，每周3次，共4周。自造模第2周开始，各药物干预组腹腔注射相应药物，每天1次，共2周。造模结束，检测血清ALT、AST、Alb水平;HE、天狼猩红染色及肝组织Hyp含量观察肝脏炎症及纤维化改变。　　结果:　　1、当归补血汤及其拆方影响肝脏血管新生的抗肝纤维体内研究结果:相比正常组，模型组大鼠体重减轻，肝体比、脾体比增加;血清ALT、AST水平升高，Alb降低;肝组织脂肪变性及胶原沉积明显，Hyp含量升高，col-Ⅰ、α-SMA表达增加;肝窦内皮窗孔闭合，肝脏微血管纹理增多，肝组织vWF及CD31表达增加;肝组织MDA含量增加，SOD活性降低，NO增多，NOS活性升高;肝组织VEGF、VEGFR2、p-ERK表达增加，ERK表达未见变化。相比模型组，各治疗组大鼠体重、肝体比无显著改变，脾体比明显降低;Alb显著提高、AST显著降低;当归补血汤及黄芪组ALT显著降低;各用药组炎症及胶原沉积有不同程度的改善;肝组织Hyp含量显著降低，col-Ⅰ、α-SMA表达有不同程度的下降;窗孔数量增加，血管纹理有不同程度减少，vWF及CD31表达下降;SOD活性显著升高，NOS显著升高，黄芪组MDA显著降低，全方组及黄芪组NO显著降低;各用药组VEGF、VEGF-R2、p-ERK表达有不同程度的减少。　　2、当归补血汤活性成分筛选结果:当归补血汤各成分对LX-2星状细胞毒性显示，毛蕊异黄酮及欧当归内酯A分别在100/μmol/L、10μmol/L浓度出现毒性，其余成分未见明显毒性;药效学显示，黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮、欧当归内酯A组具有抑制星状细胞活化作用，其IC50分别为269.05、137.92、6.62μmol/L，其他成分对LX-2细胞活化无明显抑制作用。在SK-HEP-1内皮细胞上的毒性显示，欧当归内酯A对正常的内皮细胞有一定毒性，IC50为13.69μmol/L，其余成分未见明显毒性;药效学显示，欧当归内酯A、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮具有抑制内皮细胞增殖的作用，其IC50分别为28.59、128.29、110.51、777.24μmol/L，其他成分未见明显抑制作用。各成分在HL-7702肝细胞上的毒性检测显示，欧当归内酯A、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、黄芪皂苷Ⅰ具有一定毒性，其IC50分别为1.22μmol/L、216.49μmol/L、435.15μmol/L、532.40μmol/L，其余药物未见明显毒性;药效学显示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷及黄芪皂苷Ⅱ低浓度时对H2O2损伤的HL-7702肝细胞具有保护作用，其余成分对HL-7702肝细胞H2O2损伤无保护作用。　　3、当归补血汤组分配伍抗肝纤维化体外评价:星点设计结果显示，在LX-2星状细胞活化模型上黄芪皂苷Ⅰ52-199μmol/L、毛蕊异黄酮76-146μmol/L、欧当归内酯A20-32μmol/L的浓度范围内具有最佳联用作用;Chou-Talalay联合指数法分析显示黄芪皂苷Ⅰ、欧当归内酯A、毛蕊异黄酮三者按照10∶3∶9进行配伍后，随浓度增加，联用抑制低LX-2活化效果增强，可降低LX-2中α-SMA的表达，抑制SK-HEP-1内皮细胞增殖，并在低浓度开始发挥联用作用，对HL-7702肝细胞H2O2损伤模型未见明显保护作用，但对正常HL-7702肝细胞有减毒作用;转基因斑马鱼结果显示:三者配伍组合后在浓度为70.4μmol/L时可以减少斑马鱼胚胎功能血管数量，降低斑马鱼血管生成活性　　4、当归补血汤组分配伍抗肝纤维的体内验证结果:与正常组相比，模型组血清ALT水平明显升高，白蛋白明显降低，胶原沉积明显，肝组织羟脯氨酸含量明显增加;与模型组相比，各用药组血清ALT水平有不同程度的降低，胶原沉积有不同程度的减轻，肝组织Hyp含量显著降低。　　结论:　　1、当归补血汤及其拆方具有抗肝纤维化作用，其中黄芪益气，重在改善肝脏炎症、抗脂质过氧化及NO释放，当归养血活血，重在改善星状细胞活化，增加肝窦内皮细胞窗孔数量及改善肝窦毛细血管化，二者配伍，通过保护肝窦内皮细胞损伤发挥抗肝纤维化作用。　　2、欧当归内酯A、毛蕊异黄酮、黄芪皂苷Ⅰ三种成分可能是当归补血汤抗肝纤维化的主要活性成分，初步明确了三种成分在星状细胞、内皮细胞和肝细胞上的毒、效剂量（详见结果部分）。　　3、黄芪皂苷Ⅰ、欧当归内酯A、毛蕊异黄酮按照10∶3∶9浓度组合后形成的组分配伍在体外具有抑制肝星状细胞活化、抑制内皮细胞增殖及抑制斑马鱼血管新生作用，在体内具有抗DMN诱导小鼠肝纤维化和保护肝脏炎性损伤的作用。