【摘 要】
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[目的]研究灯盏乙素对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导损伤的血管平滑肌细胞A7r5的细胞周期及增殖相关蛋白PCNA、CyclinE1、Cdk2和p27表达的调控作用,探索灯盏乙素治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的细胞分子生物学机制。[方法]1.体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5,复制ox-LDL诱导
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860641）； 云南省基础研究重点项目（202001AS070035）；
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[目的]研究灯盏乙素对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导损伤的血管平滑肌细胞A7r5的细胞周期及增殖相关蛋白PCNA、CyclinE1、Cdk2和p27表达的调控作用,探索灯盏乙素治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的细胞分子生物学机制。[方法]1.体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5,复制ox-LDL诱导损伤模型。2.CCK-8法检测不同浓度灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞增殖的影响。实验分组:正常对照组、模型组、15 μmol/L辛伐他汀组、不同浓度（25、50、100 μmol/L）灯盏乙素组。3.流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞周期的影响。4.免疫荧光检测灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞PCNA、Cdk2和p27蛋白表达的影响。5.Western blot测定灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞PCNA、CyclinE1、Cdk2和p27蛋白表达的影响。[结果]1.灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞增殖的影响:与正常对照组比较,模型组细胞增殖明显增加;与模型组比较,药物作用48 h后,细胞增殖明显减弱。2.灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞周期的影响:与正常组比较,ox-LDL诱导损伤模型组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升,G2/M期细胞比例上升:与模型组比较,25、50、100 μmol/L灯盏乙素组G0/G1期细胞比例逐渐上升,S期细胞比例逐渐下降,G2/M期细胞比例下降;辛伐他汀组G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例逐渐下降,G2/M期细胞比例下降。3.免疫荧光结果显示:与正常组比较,模型组PCNA和Cdk2的蛋白表达增强,p27的蛋白表达减弱;与模型组比较,25、50、100μmol/L灯盏乙素组PCNA和Cdk2的蛋白表达逐渐减弱,p27的蛋白表达增强;辛伐他汀组PCNA和Cdk2的蛋白表达明显减弱,p27的蛋白表达明显增强。4.Western blot结果显示:与正常组比较,模型组PCNA、CyclinE1和Cdk2蛋白表达升高,p27蛋白表达降低;与模型组相比,25、50、100 μmol/L灯盏乙素组PCNA、CyclinE1和Cdk2蛋白表达降低,p27蛋白表达升高,辛伐他汀组PCNA、CyclinE1和Cdk2蛋白表达明显降低,p27蛋白表达明显升高。[结论]1.灯盏乙素能明显抑制ox-LDL诱导损伤的血管平滑肌细胞A7r5的异常增殖。2.灯盏乙素能明显将细胞阻滞于G0/G1期。3.灯盏乙素能够明显下调ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞PCNA、CyclinE1和Cdk2的蛋白表达水平,上调p27的蛋白表达水平。4.灯盏乙素对ox-LDL诱导损伤的A7r5细胞周期阻滞作用可能与调控CyclinE1-Cdk2-p27信号通路密切相关。
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