AcrAB-TolC外排泵系统在野生型与诱导型耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的表达研究

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研究目的本课题小组前期工作已验证药物敏感性肺炎克雷伯菌(DSKP)经亚胺培南体外诱导后可对碳青霉烯类抗生素产生耐药,其耐药性不依赖于碳青霉烯酶,与膜孔蛋白omp K35表达下降有关。基于以上实验结果,本课题主要探讨亚胺培南诱导后的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌(CRKP)的耐药机制中,Acr AB-Tol C外排泵系统所起的作用,并比较野生型与诱导型耐药菌株间Acr AB-Tol C外排泵系统表达量的差异情况,对研制新型抗菌药物提供实验依据。实验方法1.复苏前期实验中亚胺培南体外诱导产生耐药的CRKP和诱导前的DSKP,收集临床分离的CRKP,共分三组,每组10株。2.使用VITEK MS微生物质谱检测系统重新对菌株进行菌种鉴定和药敏试验。3.通过PCR扩增Acr AB-Tol C外排泵系统的结构基因acr A、acr B、tol C,初步了解其分布情况。4.采用实时荧光定量PCR法,检测各组菌株acr A、acr B、tol C基因m RNA的表达水平,比较差异情况,探讨亚胺培南体外诱导肺炎克雷伯菌株产生耐药是否与Acr AB-Tol C外排泵系统的表达水平变化相关,了解该系统在野生型与诱导型CRKP的表达水平差异。实验结果1.DSKP组、诱导型CRKP组、野生型CRKP组的所有菌株均扩增出acr A、acr B和tol C基因的PCR产物。2.诱导型CRKP组菌株acr A、acr B和tol C基因表达水平虽稍高于诱导前DSKP组菌株,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.野生型CRKP组菌株acr A、acr B和tol C基因表达水平均高于诱导型CRKP组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.野生型CRKP组菌株acr A、acr B和tol C基因表达水平显著高于诱导前DSKP组菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.Acr AB-Tol C外排泵系统的结构基因acr A、acr B、tol C广泛分布于肺炎克雷伯菌株中,无论其对碳青霉烯类抗生素是否耐药。2.Acr AB-Tol C外排泵过表达是野生型CRKP的重要耐药机制之一,而在亚胺培南体外诱导肺炎克雷伯菌对其产生耐药的过程中,Acr AB-Tol C外排泵系统不起显著作用。
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