胚鼠牙胚细胞体外单层培养及与PLGA支架复合培养的实验研究

来源 :锦州医学院 辽宁医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wxbft
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目的摸索正常胎鼠牙胚细胞离体培养所需的外部条件及其与生物可降解聚合物支架PLGA的相容性.为建立牙胚细胞体外模型和“牙胚细胞—支架”复合物的体外模型等提供实验依据.方法体式显微镜下取17天龄胎鼠下第一磨牙牙胚,胶原酶/分离酶将其消化成细胞悬液①以含10%FCS的低糖DMEM为培养基,制备鼠尾胶原,用其包被培养瓶或细胞爬片,进行原代培养,倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点,MTT法测定细胞活性后绘制生长曲线,取原代培养5~7天的细胞进行组织化学、VonKossa和免疫组织化学染色.②将其接种到Ⅰ型胶原包被的PLGA三维多孔泡沫上,倒置显微镜观察细胞的粘附生长情况,培养15天扫描电镜观察细胞与支架的吸附及生长繁殖情况。结果倒置显微镜下观察,体外单层培养的细胞在24小时内贴壁,约7~9天生长连成片状,细胞为多角形、大而扁平梭形和长梭形。多角形细胞可紧密镶嵌呈铺路石状,梭形细胞散在。胞核较大,呈圆形或卵圆形,位于中间,核内1~3个核仁,核膜界限清晰,可见核分裂相.MTT检测,统计学处理表明,培养相同时间的各孔细胞活性无显著差异.由此绘制的原代细胞生长曲线表明:培养细胞在前3天生长缓慢,第4天呈对数生长,第7天达高峰。VonKossa染色可见细胞结节处有钙盐沉积.免疫组化染色结果表明:牙胚的两种细胞共生.透射电镜观察细胞内有丰富的粗面内质网、核糖体、线粒体,也可见高尔基复合体。扫描电镜观察细胞与PLGA支架紧密贴附,适度伸展且生长旺盛并可见基质分泌。结论①采用酶消化培养法,用胶原做基质饲养层,含10%FCS的低糖DMEM做为培养基,能够将胎鼠牙胚细胞培养成活,并维持其细胞学特征.②将酶消化法取得的牙胚细胞接种到Ⅰ型胶原包被的PLGA支架上,细胞紧密吸附在支架上,生长繁殖并分泌基质,表明PLGA是牙组织工程良好的支架材料。
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