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目的:揭示frataxin在HepG2细胞中的功能;同时以铁死亡为关键点,探讨frataxin在酒精暴露HepG2细胞中的铁死亡介导效应。方法:1.蛋白质组学检测:利用慢病毒转染技术,构建shRNA-FXN干扰及其空载对照转染的HepG2细胞（分别为shFXN和NC细胞）,运用TMTTM定量标记shFXN/NC细胞,LC-MS/MS分析后下机数据对比Uniprot中人的数据库,得到可信蛋白后以差异变化倍数FC>1.25或FC<0.8,且P<0.05为标准筛选差异显著蛋白。随后进行基因本体（Gene Ontology,GO）功能注释和KEGG通路富集分析。2.细胞实验处理与分组:（1）酒精对frataxin的作用:HepG2细胞分为对照组与酒精组（100 mmol/l,72小时）。Western boltting检测frataxin蛋白表达水平。（2）Frataxin缺失对酒精诱导HepG2细胞铁死亡的作用:shFXN/NC细胞分为对照组、酒精组。检测LDH与CCK8释放水平,Western boltting检测GPX4、xCT蛋白表达水平。NC细胞别分为对照组、酒精组,对应shFXN细胞分为对照组、酒精组、酒精加Fer-1组、酒精加Erastin组、Fer-1对照组（1μmol/l）和Erastin对照组（2.5μmol/l）。检测LDH与CCK8释放水平,RPA荧光探针标记观察线粒体LIP-Fe水平,BODIPY C11检测脂质ROS水平,硫代巴比妥酸比色法测定MDA。（3）Fratain降低酒精诱导HepG2铁死亡敏感性:shFXN细胞分为酒精组、酒精加Fer-1组、酒精加Erastin组、酒精加腺病毒空载组（Ad-control,12h）、酒精加腺病毒FXN组（Ad-FXN,12h）、酒精加腺病毒FXN加Fer-1组、酒精加腺病毒FXN加Erastin组。检测LDH、LIP-Fe、脂质ROS与MDA。结果:1.Frataxin缺失引起的生物过程改变与铁死亡发生机制相似。（1）蛋白质组学分析shFXN/NC细胞得到差异显著蛋白共计285个,其中110个蛋白表达上调,175个蛋白表达下调。（2）综合GO、KEGG生信分析结果及相关文献分析得出:Frataxin缺失引起胆固醇合成、谷胱甘肽代谢、NADPH产生、脂肪酸降解及胱氨酸与蛋氨酸代谢等生物过程改变,而这些过程与铁死亡的发生机制——细胞抗氧化能力降低及脂质过氧化物累积相似。2.酒精抑制frataxin的表达。HepG2细胞酒精处理后frataxin蛋白表达降低60%（P<0.05）。3.Frataxin缺失加剧酒精诱导的铁死亡。（1）Frataxin缺失加剧酒精诱导HepG2细胞活力下降。（1）转染CYP2E1后,shFXN与NC酒精处理后LDH释放均增加（P<0.01）,细胞存活率均降低,shFXN酒精组较shFXN对照组LDH释放增加且细胞存活率降低（P<0.01）。CYP2E1转染的shFXN酒精组较其未转染CYP2E1对照组LDH释放水平提高35%（P<0.05）,细胞存活率降低19%（P<0.05）。CYP2E1转染后细胞LDH水平与细胞存活率改变大于未转染细胞。以下实验结果均基于CYP2E1转染细胞。（2）酒精处理后,shFXN酒精组较其对照组,GPX4（P<0.01）和xCT（P<0.01）蛋白水平均显著降低。（2）Frataxin缺失加剧酒精诱导HepG2铁死亡发生。（1）酒精处理后,shFXN酒精组较shFXN对照组LDH释放增加,细胞存活率降低。酒精联合Fer-1处理NC与shFXN细胞后,与各自酒精对照组相比,LDH释放分别降低14%与31%,细胞存活率均有所提高。相反,酒精联合Erastin处理NC与shFXN细胞,与各自酒精对照组相比,LDH水平显著升高,细胞存活率进一步降低。（2）shFXN对照组LIP-Fe高于NC对照组。酒精处理后,NC与shFXN细胞LIP-Fe和MDA水平均增加,且后者高于前者。酒精联合Fer-1处理shFXN细胞后,LIP-Fe与MDA水平较其酒精对照组降低,而酒精联合Erastin处理shFXN细胞后,LIP-Fe与MDA水平进一步升高。4.Frataxin降低酒精诱导HepG2细胞铁死亡敏感性。酒精处理模型下,Ad-FXN组较Ad-control对照组,LDH释放及LIP-Fe产生均显著降低,MDA与脂质ROS水平亦降低。酒精联合Fer-1及Erastin处理后,细胞LDH释放、LIP-Fe、MDA产生及脂质ROS水平均降低。结论:HepG2细胞frataxin沉默后影响下游胆固醇合成、谷胱甘肽代谢、NADPH产生、脂肪酸降解及胱氨酸与蛋氨酸代谢等生物过程,提示frataxin影响铁死亡的发生。酒精抑制frataxin表达,诱导铁死亡,而frataxin缺失进一步加剧酒精对铁死亡的诱导作用,恢复frataxin蛋白水平则可降低酒精诱导HepG2铁死亡敏感性。