【摘 要】
:
目的:正常情况下SMP30有七种剪接变异体,但七种变异体在肝细胞癌中表达水平有否区别值得探讨。通过检测肝癌细胞株、肝癌及相应癌旁组织中SMP30剪接变异体转录情况,对比七种剪接变异体的转录水平差异,了解SMP30在转录水平的选择性剪接作用,有助于探讨SMP30基因在肝癌的发生发展中的作用。方法:(1)分析已经报道的SMP30七种剪接变异体的碱基序列差异,并设计针对每一种剪接变异体的鉴定引物。(2)
【基金项目】
:
国家自然科学基金(81460432),SMP30表观遗传学对肝癌细胞生物学特性影响机制研究; 国家自然科学基金(81160362),血清抗瘤抗体检测对肝癌早期发现和广西HCC高危人群预警作用的研究; 广西自然科学基金(2015GXNSFDA139017),SMP30差异表达和翻译后修饰与肝癌血清中自身抗体关系研究;
论文部分内容阅读
目的:正常情况下SMP30有七种剪接变异体,但七种变异体在肝细胞癌中表达水平有否区别值得探讨。通过检测肝癌细胞株、肝癌及相应癌旁组织中SMP30剪接变异体转录情况,对比七种剪接变异体的转录水平差异,了解SMP30在转录水平的选择性剪接作用,有助于探讨SMP30基因在肝癌的发生发展中的作用。方法:(1)分析已经报道的SMP30七种剪接变异体的碱基序列差异,并设计针对每一种剪接变异体的鉴定引物。(2)通过RT-PCR的实验方法将GS-Hep G2、Hu H-7、Hep3B2.1-7、SK-hep1、SK-hep1-SMP30五种肝癌细胞株及临床上收集的21例手术切除的HCC患者肝组织的RNA逆转录成c DNA。(3)通过实时荧光定量PCR检测c DNA中SMP30基因的整体转录水平,并用PCR检测SMP30七种剪接变异体的表达情况,用image J图像处理软件测量条带亮度,结合HCC患者的性别、年龄、AFP值、乙肝两对半、乙肝病毒DNA拷贝数、ALT、AST、肝硬化、肿瘤大小、肝细胞癌分级等临床指标,分析SMP30在肝癌的发生发展中的作用。(4)构建SMP30三个蛋白亚型的真核表达载体,为后续分别在肝癌细胞株中过表达SMP30的三个蛋白亚型,研究SMP30三种不同蛋白亚型的功能奠定基础。结果:(1)GS-Hep G2和Hu H-7细胞系中均存在SMP30七种剪接变异体,Hep3B2.1-7存在6种剪接变异体,未检测到Vx2的存在,在GS-Hep G2、Hu H-7、Hep3B2.1-7三种细胞中,V1、Vx1的表达量均占主导地位,用image J图像处理软件测量条带亮度,V1、Vx1两种剪接变异体之和分别占了GS-Hep G2、Hu H-7、Hep3B2.1-7细胞株中总的SMP30表达量的57.5%、63.5%、81.4%。SK-hep1细胞株低表达SMP30;在SK-hep1细胞株中过表达SMP30全长900bp的CDS后,不但检测到了全长900bp的CDS片段,同时检测到了684bp的低片段的CDS,即:在SK-hep1细胞株中过表达了SMP30的剪接变异体V1和V2后,V1和V2通过剪接过程产生了V4和Vx1,说明在细胞中过表达外源性的基因后,外源基因会参与到细胞内的剪接过程,并且在无UTR存在的情况下发生了剪接,提示剪接过程存在负反馈调控。(2)22对肝癌样本中,实时荧光定量PCR显示癌组织中的SMP30表达量低于对应的癌旁组织的SMP30的表达量,平均下调了4.16±3.20个Ct值(P<0.05)。PCR结果显示:相对于癌旁组织,癌组织中V2(P<0.05)、V3(P<0.05)、V4(P<0.05)、Vx1(P<0.05)、Vx2(P<0.05)、Vx3(P<0.05)六种剪接变异体的下调具有统计学意义,癌旁正常组织和癌组织中SMP30剪接变异体V1的相对表达量差异没有显著性(P>0.05)。统计学分析结果显示,V1在乙肝e抗体阳性的病人中下降得比阴性的病人多(P<0.05),Vx3在乙肝e抗原阴性的肝细胞癌病人中下降得比阳性的多(P<0.05),V1、V2、V3、V4、Vx1、Vx2、Vx3在癌组织中的下调量及总的SMP30的下调量与HCC患者的性别、年龄、AFP值、乙肝病毒DNA拷贝数、ALT、AST、肝硬化等指标无关(P>0.05)。(3)在一例B淋巴瘤肝组织转移的样本中,V2、V3、V4、Vx1、Vx2、Vx3不表达,这提示SMP30的剪接变异体V2、V3、V4、Vx1、Vx2、Vx3可能与转移有比较密切的关系。结论:(1)设计出可以用于鉴定SMP30七种剪接变异体的引物。(2)可变剪接过程可能存在负反馈调控。(3)肝癌组织中SMP30转录水平的下调是因为SMP30的V2、V3、V4、Vx1、Vx2、Vx3六种剪接变异体的下调导致的,剪接变异体V1的转录水平相对稳定。(4)SMP30的剪接变异体V1和Vx3可能是一个潜在的乙肝病毒e抗原抗体标记物。(5)构建出SMP30三种蛋白亚型的过表达载体,为后续研究SMP30三种蛋白亚型的功能奠定了基础。
其他文献
目的:了解某多民族乡镇高血压患病情况及影响因素。方法:回顾性分析某乡镇卫生院2017年1月1日至2019年12月31日年龄≥30岁以上常住居民健康档案,整群普查所得的数据按流行病学调查方法进行统计学分析。结果:1.一般情况:共调查18616人,其中男性9478人(50.91%),女性9138人(49.09%)。年龄30~85岁,平均年龄(45.69±5.25)岁。壮族11537人,汉族3134人,
目的通过发放问卷调查,评估以全科医师为主的家庭医生签约服务在基层乡镇应用效果,为进一步完善家庭医生签约服务内容,规范服务管理,改善服务方式,提高服务质量提供参考意见。方法选取钦州市大某坡镇内三个行政村的153例高血压患者为研究对象,根据患者是否签约以全科医生为核心的家庭医生团队分为签约组(81例)和非签约组(72例)。回顾一年来对两组患者在高血压认知、治疗依从性等方面的情况进行分析,评估管理效果。
目的:探讨超声引导下椎板后阻滞(Retrolaminar block,RLB)联合塞来昔布治疗非特异性下腰痛(Nonspecific low back pain,NLBP)的有效性及安全性。方法:随机选取50例诊断为非特异性下腰痛的患者参与本次研究,对纳入的患者通过随机数字表分为两组:对照组(C组)25例,以口服塞来昔布(0.2g/次,2次/日,早上、晚上各1次)药物治疗,连续服药2日,期间若患者
目的:了解某乡镇中心卫生院院前急救特点及转诊情况。方法:收集2018年9月至2019年8月某乡镇中心卫生院院前急救的性别、年龄、初步诊断、急救半径、呼救时间、急救干预情况、死亡情况及转诊等资料,使用EXCEL进行数据录入和整理,并进行二次核对。运用SPSS21.0统计软件对数据进行统计分析。根据是否转上级医院,分为转诊组和非转诊组,两组间构成比之间的差异性比较采用卡方检验。以P<0.05为差异具有
背景:院前急救是急诊救护系统的重要组成部分,快速有效的院前急救对保障患者生命,减少患者的伤残率和致死率至关重要。研究表明,院前急救救护车资源利用可能存在不合理因素,但是目前尚缺乏系统性相关研究。目的:分析广西贵港市院前急救流行病学特征、区域内救护车利用度现状以及院前急救疾病谱构成情况,探讨救护车利用度的可能影响因素,为改善救护车利用度提出建设性意见。方法:收集广西贵港市急救中心2014-2019年
目的:通过Meta分析,系统地评价2型糖尿病病人痴呆的发病与应用口服制剂类降糖药物二甲双胍之间的关系。方法:使用自由词检索联合主题词检索的方法,检索Pub Med、Springer Link、Web of Science、Embase、The Cochrine Liberary、MEDLINE、Weipu Database、CNKI、CBM、Wanfang Database中,有关于将口服二甲双胍
目的运用RT-qPCR方法检测Linc00324在白血病和正常人外周血白细胞中的表达,并比较相对表达量的差异;根据患者的相关临床资料,分析Linc00324的表达水平与临床相关检测指标的相关性,以期明确Linc00324在白血病患者诊断、治疗、预后中的作用。方法1.采集白血病患者外周血白细胞49例,所有白细胞均取自临床表现,细胞形态学、免疫分型、染色体分型确诊的白血病患者。正常对照组为年龄、性别匹
目的:研究2016-2018年玉林市急救中心院前急救流行病学特征和疾病谱变化规律,并进一步分析院前死亡患者的特征,为有关部门制定院前急救策略提供科学依据。方法:收集玉林市120急救中心2016年1月1日至2018年12月31日所有登记在册的院前急救患者的相关数据,采用Excel软件建立数据库,对时间、性别、年龄、诊断等项目进行分类和整理,运用SPSS 23.0进行相关统计学分析,回顾性分析院前急救
目的:了解血D-二聚体在急性缺血性脑卒中早期的水平变化趋势,探讨D-二聚体在基层医院对于急性缺血性脑卒中疾病的筛查价值。方法:选取2019年9月至2020年4月期间因疑似急性缺血性脑卒中在合浦县公馆镇中心卫生院住院并行颅脑CT检查确诊脑梗塞的61例患者为观察组,同时选取同期在合浦县公馆镇中心卫生院进行健康体检的47例健康体检者为对照组,再依据梗死面积将观察组患者分成腔隙性梗组(梗死的横断面最大径<
目的回顾既往收治的POEMS(polyneuropathy、organomegaly、endocrinopathy、M protein and skin changes)综合征患者的病案资料,探索不同的临床特征分类下的差异性,并总结分析其特征规律,为临床诊疗提供参考。方法回顾性分析2003年1月-2019年8月广西医科大学第一附属医院收治的19例POEMS综合征患者的病案资料。根据POEMS综合征