【摘 要】
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目的:探讨硫酸铍（beryllium sulfate,BeSO4）诱导人支气管上皮细胞（16HBE）恶性转化过程中长链非编码RNA SNHG11的作用及其机制。方法:1、用CCK-8法测定0、20、50、125和312.5μM BeSO4染毒16HBE细胞48 h后的细胞活力,计算半数抑制浓度（IC50）。2、用50μM BeSO4处理16HBE细胞45代（约23周）,每代染毒24 h,3-4天传
【基金项目】
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国家自然科学基金:“内源性硫化氢在硫酸铍致肺细胞炎症、氧化损伤中的保护作用及其机制研究”,项目批号:81573193； 湖南省自然科学基金:“circRNA通过JAK-STAT信号通路调控EMT参与硫酸铍致肺纤维化”,项目批号:2020JJ4082；
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目的:探讨硫酸铍（beryllium sulfate,BeSO4）诱导人支气管上皮细胞（16HBE）恶性转化过程中长链非编码RNA SNHG11的作用及其机制。方法:1、用CCK-8法测定0、20、50、125和312.5μM BeSO4染毒16HBE细胞48 h后的细胞活力,计算半数抑制浓度（IC50）。2、用50μM BeSO4处理16HBE细胞45代（约23周）,每代染毒24 h,3-4天传一代,设立平行传代的16HBE细胞对照组,同时观察每代细胞形态。分别对50μM BeSO4处理组与对照组的0、15、25、35、45代细胞进行细胞生长曲线测定、软琼脂克隆形成实验,Western blot检测各阶段细胞的迁移、侵袭、增殖、肿瘤促进和肿瘤抑制相关蛋白MMP2、MMP9、PCNA、cyclin D1和p53表达水平,并用q RT-PCR法检测其lncRNA SNHG7、SNHG11、SNHG15、MIR22HG、lncRNA lnc-GMPS-1:4（GMPS）和lnc-SIK1-2:1（SIK1）表达水平。3、采用si RNA-SNHG11转染BeSO4诱导的16HBE恶性转化细胞（T-16HBE）,并设阴性序列对照组、T-16HBE细胞组和平行传代16HBE细胞组。用q RT-PCR检测各组细胞中lncRNA SNHG11表达水平,用CCK-8法测定细胞活力,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力,Western blot测定MMP2、MMP9、PCNA、cyclin D1和p53蛋白的表达情况。结果:1、BeSO4染毒16HBE细胞48 h的IC50约为256μM,50μM BeSO4染毒的16HBE细胞存活率大于80%。2、与平行传代对照比较,50μM BeSO4处理的16HBE细胞在第15代时,MMP2、PCNA和p53蛋白表达上调（P＜0.01）;第25代时,软琼脂克隆形成率上调（实验组（1.3±0.2）‰,对照组0‰）（P＜0.01）,MMP2、PCNA蛋白表达上调（P＜0.01）;第35代时,部分细胞形态由上皮样转化为梭型样,细胞倍增时间缩短（实验组（32.0±0.4）h,对照组（34.0±0.8）h）（P＜0.01）并出现细胞重叠生长,软琼脂克隆形成率显著上调（实验组（14.5±2.9）‰,对照组0‰）（P＜0.01）,MMP2、MMP9、PCNA和cyclin D1蛋白显著上调而p53蛋白下调（P＜0.05）;第45代时,细胞形态由上皮样转化为梭型样,细胞倍增时间显著缩短（实验组（29.1±0.2）h,对照组（34.4±0.5）h）（P＜0.001）,细胞重叠生长更为明显,软琼脂克隆形成率显著上调（实验组（21.2±5.0）‰,对照组（0.7±0.4）‰）（P＜0.01）,MMP2、MMP9、PCNA和cyclin D1蛋白显著上调而p53蛋白下调（P＜0.05）。3、与平行传代对照比较,随BeSO4染毒时间的延长,lncRNA MIR22HG和SIK1总体表达趋势下调（P＜0.05）,lncRNA SNHG15表达无明显变化;lncRNA SNHG7、SNHG11和GMPS表达水平总体趋势上调（P＜0.05）,其中lncRNA SNHG11在BeSO4处理的不同代数细胞中均为上调（P＜0.01）,且在第45代时差异表达上调最明显。4、与平行传代对照比较,CCK-8实验、Transwell实验结果显示BeSO4诱导的16HBE恶性转化细胞增殖活力、细胞迁移和侵袭能力均显著增强（P＜0.001）,Western blot结果表明MMP2、MMP9、cyclin D1和PCNA蛋白表达上调而p53蛋白表达下调;当T-16HBE细胞转染si RNA-SNHG11后,与阴性序列对照比较,T-16HBE细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降（P＜0.001）,MMP2、MMP9、cyclin D1和PCNA蛋白表达下调而p53蛋白表达上调（P＜0.001）。结论:1、BeSO4长期处理能够诱导16HBE细胞发生恶性转化。2、BeSO4诱导的16HBE恶性转化细胞中lncRNA SNHG11表达明显上调,敲低SNHG11后16HBE恶性转化细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降。3、LncRNA SNHG11可能通过上调MMP2、MMP9、PCNA、cyclin D1和抑制p53蛋白的表达促进BeSO4诱导的16HBE细胞恶性转化。
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