【摘 要】
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目的:通过干预JAK-STAT通路信号传导及敲低其上游信号分子白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）,探讨JAK-STAT通路在硫酸铍致16HBE细胞上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用及其调控机制,结合前期研究,进一步阐明硫酸铍的毒作用机制。方法:1.用0、100、150、200、250、30
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目:内源性硫化氢在硫酸铍致肺细胞炎症、氧化损伤中的保护作用及其机制研究（81573193）（导师张朝晖主持）； 湖南省自然科学基金面上项目:长链非编码RNA调控上皮间质转化在硫酸铍致肺纤维化中的作用及其机制研究（2020JJ4082）（导师张朝晖主持）；
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目的:通过干预JAK-STAT通路信号传导及敲低其上游信号分子白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）,探讨JAK-STAT通路在硫酸铍致16HBE细胞上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用及其调控机制,结合前期研究,进一步阐明硫酸铍的毒作用机制。方法:1.用0、100、150、200、250、300μmol/L的硫酸铍处理16HBE细胞48h,蛋白免疫印迹法（WB）检测LIF及JAK-STAT通路蛋白（JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3）的表达水平。使用2.5μmol/L的氯硝柳胺（JAK-STAT通路抑制剂）预处理16HBE细胞8h后,再用150μmol/L的硫酸铍处理16HBE细胞48h,WB检测炎症相关蛋白（i NOS、COX2）与EMT相关蛋白（Collagen Type I、α-SMA、Snail、E-Cadherin）的表达水平。2.用LIF-si RNA处理16HBE细胞6h后,再用150μmol/L的硫酸铍处理16HBE细胞48h,WB检测JAK-STAT通路蛋白以及EMT相关蛋白的表达水平。3.结合前期研究推测LIF可能受mi R-663b调控。使用Target Scan网站预测LIF与mi R-663b结合位点,并构建含野生型（WT）与突变型（MUT）序列的双荧光素酶报告质粒载体(pmi R-RB-ReportTM),将质粒载体与mi R-663b mimics共转染,双荧光素酶报告实验检测LIF与mi R-663b的结合关系。结果:1、与对照组比较,硫酸铍处理16HBE细胞后JAK-STAT通路中JAK1和STAT3蛋白表达水平无明显改变;SOCS3蛋白表达水平显著降低,p-JAK1、p-STAT3的水平显著升高（P＜0.05）。2、2.5μmol/L的氯硝柳胺可有效降低硫酸铍染毒后16HBE细胞中p-STAT3的表达水平（P＜0.05）。与空白对照组比较,150μmol/L硫酸铍染毒组16HBE细胞中i NOS、COX2、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平上升,E-Cadherin蛋白表达水平下降（P＜0.05）。与150μmol/L硫酸铍染毒组相比,2.5μmol/L氯硝柳胺+150μmol/L硫酸铍组16HBE细胞中i NOS、COX2、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平下降,E-Cadherin蛋白表达水平上升（P＜0.05）。3、使用不同浓度的硫酸铍处理16HBE细胞后,各组细胞中LIF表达水平均上升（P＜0.05）。与150μmol/L硫酸铍组相比,LIF-si RNA+150μmol/L硫酸铍组16HBE细胞内p-JAK1、p-STAT3、Collagen Type I、α-SMA、Snail蛋白表达水平下降,E-Cadherin蛋白表达水平上升（P＜0.05）。4、共转染质粒载体与mimics后,各组间荧光素酶活性并未有统计学差异,尚不足以认为LIF在预测位点处存在与mi R-663b的结合关系。结论:1、硫酸铍通过激活细胞内JAK-STAT通路引起16HBE细胞炎症反应与EMT过程。2、硫酸铍通过增加细胞中LIF的表达,激活JAK-STAT通路诱导16HBE细胞发生EMT过程。
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