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目的本课题旨在研究可注射型富血小板纤维蛋白(Injective platelet-rich fibrin,iPRF)对于兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、成骨矿化及分化的影响及分子机制,为i-PRF在临床口腔种植修复等方面提供应用依据。方法1本实验使用组织块法培养兔原代骨髓间充质干细胞,通过细胞形态观察及免疫荧光方法进行细胞鉴定。2实验分为空白对照组、PRF组及i-PRF组。通过采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测三组细胞增殖能力。3通过碱性磷酸酶(ALPase)检测试剂盒检测检测三组细胞内ALPase蛋白活性。4通过茜素红染色检测三组细胞成骨矿化结节形成情况;油红O染色检测三组细胞内脂滴形成情况。5采用RT-qPCR检测三组细胞成骨分化相关基因Runx2、BGP、OPN和成脂分化相关基因PPARγ的mRNA水平。结果1通过组织块法成功分离并培养兔牙槽骨组织来源细胞,显微镜下观察细胞为长梭形。细胞免疫荧光法检测结果显示培养所得细胞造血干细胞表面抗原CD34呈阴性,而间充质干细胞系表面抗原CD44、STRO-1呈阳性,符合间充质干细胞表面抗原特征。2兔BMSCs增殖能力检测结果:第3、4、5、6天i-PRF组和PRF组细胞的增殖活性均显著强于空白组(均P<0.05);第3、4、5天i-PRF组和PRF组两组细胞的增殖活性无显著性差异(均P>0.05),第6天i-PRF组细胞的增殖活性显著高于PRF组(P<0.05)。这说明i-PRF与PRF均具有促进BMSCs增殖的能力,并且i-PRF促进BMSCs增殖的能力强于PRF。3兔BMSCs内ALPase活性情况:第3、5、7、9天i-PRF组和PRF组细胞的ALPase活性均显著高于空白对照组(均P<0.01),而各个时间点i-PRF组与PRF组相比细胞内ALPase活性无显著性差异(均P>0.05)。这说明i-PRF有促进BMSCs成骨分化的效果等同于PRF。4兔BMSCs钙化结节情况:i-PRF组和PRF组细胞内钙结节形成量均显著高于空白组(均P<0.05);而i-PRF组与PRF组两组细胞的钙结节形成无显著性差异(P>0.05)。这说明i-PRF具有与PRF相似的促进BMSCs成骨矿化的能力。5成骨相关基因的表达:第5、7天i-PRF组和PRF组细胞的成骨相关基因Runx2、OPN和BGP的mRNA水平均显著高于空白组(均P<0.05);而各个时间点i-PRF组与PRF组相比Runx2、OPN、BGP的mRNA水平无显著性差异(均P>0.05)。这说明i-PRF促进BMSCs内成骨相关基因表达的作用与PRF相似。6兔BMSCs内脂滴形成情况:i-PRF组和PRF组细胞内脂滴形成量均显著低于空白组(均P<0.05);而i-PRF组与PRF组两组细胞的脂滴形成无显著性差异(P>0.05)。这说明i-PRF与PRF均具有抑制BMSCs成脂分化的能力。7成脂相关基因的表达:第5、7天i-PRF组和PRF组细胞的成脂相关基因PPARγ的mRNA水平均显著低于空白组(均P<0.05);而各个时间点i-PRF组与PRF组相比PPARγ的mRNA水平无显著性差异(均P>0.05)。这说明i-PRF抑制BMSCs内成脂相关基因表达的作用与PRF相似。结论1体外培养的兔牙槽骨来源的细胞符合BMSCs的特征。2 i-PRF与PRF均可促进BMSCs细胞的增殖,i-PRF促进BMSCs增殖的效果优于PRF。3 i-PRF促进BMSCs成骨分化的能力等同于PRF,i-PRF促进成骨相关基因Runx2、BGP、OPN的mRNA表达的能力等同于PRF。4 i-PRF抑制BMSCs细胞成脂分化的能力等同于PRF,抑制成脂相关基因PPARγ的mRNA表达的能力等同于PRF。图8幅;表4个;参78篇。