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背景:恩诺沙星（Enrofloxacin,EFX）又名乙基环丙沙星、恩氟沙星,为合成的第三代喹诺酮类抗菌药物,本品被国家指定为动物专用药。具有广谱抗菌活性,对革兰氏阴性菌有很强的杀灭作用,对革兰氏阳性菌和支原体也有良好的抗菌作用。EFX作用迅速,安全性高,通透性强,口服吸收好,血药浓度高且稳定,其代谢产物为环丙沙星（Ciprofloxacin,CFX）,仍有强大抗菌作用。然而,EFX的水溶性低和耐药性对其应用前景不利,因此结构修改对于提高其有效性是必要的。恩诺沙星-钙配合物（EFX-Ca）是以EFX为配体,与金属钙离子进行螯合配位,通过配合方式得到的新型EFX金属配合物。目前为止,虽已出现了部分以EFX为其一配体的混配金属配合物的相关研究,但以EFX为单一配体的过渡金属螯合物的相关药物体内的代谢过程研究的报道很少,亟待系统地开展这一方向的整体研究。为此,在新药研制的过程中,对药物在机体内动力学特征、体内残留规律的研究,已经成为新药开发过程中的一个至关重要且不可忽略的组成部分。本试验进行了EFX-Ca口服给药后在鸡体内的药动学研究,并对EFX-Ca在鸡组织中的残留消除规律进行了研究。目的:1.为了可以更好地了解EFX-Ca在健康黄羽肉鸡体内的吸收、分布、代谢、消除过程,建立液相色谱-质谱联用法（LC-MS）检测EFX-Ca在黄羽肉鸡体内的药代动力学研究方法。通过对EFX-Ca在鸡体内药物代谢动力学的研究,为EFX-Ca在鸡病防治过程中的临床合理用药提供参考。2.为了可以更好地了解EFX-Ca在健康黄羽肉鸡体内停药后药物的标志残留物在鸡组织中的残留浓度变化规律,建立LC-MS法检测EFX-Ca在黄羽肉鸡体内的残留消除研究方法。通过检测药物标志残留物在鸡组织中的残留浓度,获得停药后药物鸡组织中的EFX和CFX残留浓度变化规律,为制订新型金属配合物EFX-Ca在鸡体内的休药期提供理论依据。方法:1.建立LC-MS法用于检测EFX-Ca的体内药物血药浓度变化,并进行方法学验证。试验采用1%甲酸/甲醇溶液对血浆样品进行处理,液相仪为赛默飞Ulti Mate 3000 RS;色谱柱为Thermo Hypersil GOLD 100×2.1 mm,3μm;流速:0.4 m L/min;水相:0.1%甲酸水溶液;有机相:0.1%甲酸/乙腈;进样体积为2.00μL的色谱条件进行检测;质谱仪为赛默飞TSQ Quantum,电喷雾电离源（ESI）;扫描方式:正负离子切换扫描;检测方式:选择反应监测（SRM）;采用经口给药方式,分别给予EFX和EFX-Ca在给药后不同的时间点进行黄羽肉鸡翅下静脉采血,分离血浆后用于液质检测。2.本实验通过建立鸡可食性组织中残留标示物EFX和CFX残留量的LC-MS检测方法,并进行方法学验证。从方法专属性、线性、精密度和回收率、检测限和定量限等方面进行验证,并配制EFX和CFX高、中、低三个浓度的QC样品,用于质控检测;采用饮水服药5天后,分别于停药后5个时间点进行采样,鸡颈静脉放血处死后,每只鸡采集组织样品肌肉100～200g（胸肌）,肝脏取全肝,肾脏取全肾,皮脂10-20g,在经验证液质联用方法下检测组织残留浓度。结果:1.本试验建立了测定肉鸡血浆样品中EFX的液相色谱串联质谱法,并完成了方法学验证。该方法在1-5000 ng/m L浓度范围内线性关系良好r~2＞0.99,专属性好,同时日间与日内准确度RE%均＜15%和精密度RSD%＜5%、回收率＞90%,信号响应灵敏。各方面均符合方法学考察要求;经验证的方法应用于EFX与EFX-Ca在肉鸡体内的药代动力学研究对比,得到药动学参数:恩诺沙星血浆Tmax为1.50±0.57 h,Cmax为1.55±0.73μg/m L,AUC（0-∞）为24.58±6.00 h·μg/m L,t1/2为5.92±1.33 h,MRT（0-∞）15.34±4.60 h,CL为423.25±90.72;恩诺沙星-钙配合物Tmax为1.83±0.40 h,Cmax为2.32±0.91μg/m L,AUC（0-∞）为48.05±20.81 h·μg/m L,t1/2为10.92±0.50,MRT（0-∞）为17.71±2.31 h,CL为251.79±128.15 m L/h/kg。2.建立了测定肉鸡组织样品中EFX和CFX的LC-MS法,并完成了方法学验证。EFX和CFX线性范围在1～5000 ng/m L,呈线性相关,相关系数大于0.99,方法定量限为1 ng/g,检测限分别为0.2 ng/m L,1 ng/m L。鸡组织中添加EFX和CFX,回收率均在80%以上,精密度均小于15%。上述技术参数能满足本次鸡组织中EFX和CFX残留试验的检测要求;残留消除规律研究结果表明,在零休药期时,各组织中残留物的平均残留量最高。在停药1 d后,在鸡各组织中的总残留含量仍然高于国家最高残留限量（MRL）,皮肤和脂肪组织的总残留量在停药第3 d已经低于MRL。停药7 d后,其余组织（肌肉、皮脂和肝脏）的总残留量也降至相应的MRL以下,第12 d以后均未检测出残留量。结论:1.本试验建立了专属性强、灵敏度高、稳定性好的LC-MS测定方法,能够运用于EFX与EFX-Ca在鸡体内血浆中的含量测定。通过药动学研究发现,口服EFX-Ca较EFX吸收加快、分布更广、消除延长。进一步说明EFX-Ca口服吸收好,血药浓度高,在体内分布广泛,生物利用度高,在鸡体内消除缓慢。2.本试验建立并验证一种可同时测定鸡可食用部位中EFX及其代谢物CFX残留浓度的LC-MS方法,为进一步探究EFX-Ca在鸡组织中的残留消除规律奠定基础。通过残留消除规律研究发现,EFX-Ca按推荐剂量的最大限量用药120 mg/L连续给药5 d,该药物在鸡各组织中的总残留量在停药第7 d低于MRL,运用休药期软件拟合,综合得到该药物的休药期为8 d。