研究背景:鼻咽癌是一种恶性程度高,病程发展快速的癌症。鼻咽癌在我国虽然分布具有一定地域性,主要高发于南部的两广地区,但却是耳鼻喉科导致患者死亡的主要恶性肿瘤疾病。鼻咽癌的发病因素较多,包括遗传因素、环境因素以及EB病毒感染等,鼻咽癌对放疗敏感度高,目前比较有效的治疗手段是放射治疗,但放疗可导致放射性颜神经损伤、放射性口干燥症等并发症,甚至出现放射抗拒,严重影响患者的生存质量和生存率。因此,临床上在不断寻找可以更好控制鼻咽癌、适合解决临床上出现的难题的药物。近年来对于传统中药香加皮的研究发现并阐释了其多种药理学作用,如抗炎、强心、抗癌等。其中,杠柳苷元是香加皮产生抗炎作用的主要有效成分,并且在癌细胞增殖抑制以及凋亡方面作用明显,是具有研究价值的抗肿瘤中药单体。本课题经抗鼻咽癌药物筛选中发现杠柳苷元可抑制鼻咽癌细胞,但目前无杠柳苷元作用于鼻咽癌的相关机制报道。基于此,本实验将初步探讨杠柳苷元对鼻咽癌细胞的作用及机制。研究目的:探讨杠柳苷元作用于人鼻咽癌CNE-2细胞的影响及其潜在的分子机制。方法:将不同浓度的杠柳苷元用于处理鼻咽癌CNE-2细胞。通过Cell Titer-Glo发光法检测细胞在48小时的生长情况,计算细胞抑制率;使用Cytoscape软件进行网络构建,分析及可视化工作,作图构建杠柳苷元-靶点-鼻咽癌网络模型。通过DAVID网站进行GO分析和KEGG通路富集分析。寻找到一至两个重要的基因靶点;利用实时荧光定量PCR检测,分析不同浓度下杠柳苷元对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡相关的Caspase3基因、EGFR基因的表达;利用Western blot检测鼻咽癌细胞CNE-2的Caspase3蛋白、EGFR蛋白在杠柳苷元不同浓度下的表达。研究结果:通过酶标仪测定得出杠柳苷元对鼻咽癌细胞CNE2呈现剂量浓度依赖的关系。杠柳苷元浓度上升时对鼻咽癌细胞CNE2的抑制率随着浓度的增大而增大。通过Pharm Mapper、STRING和KOBAS 3.0数据库的综合分析,将杠柳苷元及鼻咽癌靶点映射交集后找到表皮生长因子EGFR、Caspase3、MET、CDK2、GSK3B、SRC等12个关键靶点,GO分析和KEGG通路富集分析显示,杠柳苷元对鼻咽癌的抗瘤作用可能与影响细胞分裂增殖、凋亡等生物学过程有关。进一步通过RT-q PCR和Western blot进行细胞实验结果表明,杠柳苷元明显上调了Caspase3的表达,诱导了细胞的凋亡。研究结论:1.杠柳苷元可抑制鼻咽癌CNE2细胞。2.杠柳苷元对鼻咽癌的抗瘤作用在网络药理学分析中表现为多靶点多途径。其中分析得到caspase3和EGFR在Pathway in cancer通路上。3.杠柳苷元能够使caspase3的表达量上调,诱导鼻咽癌细胞凋亡。