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目的:1.观察电针对MCAO/R大鼠神经功能恢复的影响;2.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓及外周血CD34+EPCs数量的影响;3.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓p-AKT蛋白表达的影响;4.探讨电针对MCAO/R大鼠大脑皮质缺血区p-AKT、eNOS、MMP-9表达的影响;5.探讨电针对MCAO/R大鼠大脑皮质区缺血微血管密度、脑梗死体积的影响;6.探讨电针能否通过PI3K/AKT信号通路促进骨髓EPCs动员至外周血,参与MCAO/R大鼠大脑皮质缺血区血管再生。方法:采用改良线栓法制备雄性SD大鼠局灶脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型,120只SD SPF级雄性大鼠随机分为四组:假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+LY294002组(I/REL组)。局灶脑缺血90min后,根据再灌注时间点的不同,将除Sham组以外的各组分为24h、48h、7d三个亚组。取大鼠“百会”穴(GV20)及左侧“四关”穴为电针穴位,于再灌注一小时后进行电针刺激,每次20分钟,每日1次,最长时间为7d。采用zea-longa5分法进行神经功能缺损评分,采用流式细胞术检测骨髓、外周血cd34+epcs的数量变化,采用westernblot检测骨髓p-akt蛋白表达情况,采用westernblot检测大脑皮质缺血区p-akt蛋白表达情况,采用免疫组化检测大脑皮质缺血区enos、mmp-9蛋白、cd34+微血管密度(microvesseldensity,mvd)表达规律,采用荧光定量pcr检测大脑皮质缺血区enosmrna表达情况;ttc染色观察局灶脑缺血灌注后第7d各组别脑梗死体积。结果:1.各组大鼠神经功能缺损评分除sham组无神经功能缺损症状。其余各组大鼠行mcao/r术后,均呈现出不同程度的神经功能缺损症状。i/re组再灌注24h、48h及7d,神经功能缺损症状逐渐改善,与i/r组相比,于再灌注后第7d神经功能缺损评分显著降低(p<0.05)。在pi3k特异性拮抗剂ly-294002干预下,电针刺激未能显著改善再灌注损伤大鼠的神经功能(p>0.05)。2.电针对mcao/r大鼠骨髓cd34+epcs数量的影响大鼠局灶脑缺血/再灌注后24h、48h,i/r组骨髓cd34+epcs数量较sham组明显升高(p<0.01),且于24h达到高峰,7d时i/r组骨髓cd34+epcs数量略高于sham组,但无统计学差异(p>0.05)。电针刺激后,骨髓cd34+epcs于再灌注后各时间点较i/r组明显升高(p<0.05),后随再灌注时间延长而逐渐降低。阻断pi3k作用后,电针刺激未能显著上调骨髓cd34+epcs数量,i/rel组cd34+epcs数量较i/re组显著降低(p<0.05)。3.电针对mcao/r大鼠外周血cd34+epcs数量的影响再灌注后24h、48h,i/r组cd34+epcs数量较sham组显著增多(p<0.01),7d时降至sham组水平。i/re组cd34+epcs数量在再灌注后各时间点较i/r组增多更为显著(p<0.05)。腹腔注射ly-294002干预后,i/rel组的cd34+epcs数量较i/re组显著降低(p<0.05)。4.电针对mcao/r大鼠骨髓p-akt蛋白表达影响sham组p-akt表达较少。i/r组p-akt蛋白随再灌注时间延长而逐渐增多,且明显高于sham组(p<0.01)。i/re组p-akt表达较i/r组明显增高(p<0.05)。在pi3k特异性拮抗剂ly294002作用下,电针刺激未能有效提高p-akt表达,i/rel组p-akt表达明显低于i/re组(p<0.05)。5.电针对mcao/r大鼠大脑皮质缺血区p-akt表达的影响sham组p-akt蛋白表达较少,i/r组大脑皮质缺血区p-akt蛋白表达随再灌注时间延长而逐渐升高,且明显高于sham组(p<0.01),i/re组各时间点p-akt表达较i/r明显增高(p<0.05)。ly294002阻断pi3k作用后下,电针刺激未能有效提高p-akt表达,i/rel组p-akt表达低于i/re组(p<0.05)。6.电针对mcao/r大鼠大脑缺血皮质区enos蛋白和mrna表达的影响i/r和i/re组再灌注后各时间点enos表达均显著高于sham组(p<0.01),i/re组各时间点enos的表达较i/r组增多(p<0.05)。使用ly294002阻断pi3k作用后,i/rel组enos表达较i/re组降低(p<0.05)。7.电针对mcao/r大鼠大脑缺血皮质区mmp-9蛋白表达的影响sham组大脑皮质mmp-9表达很少。与sham组相比,i/r组mmp-9表达于再灌注后24h开始增加(p<0.05),48h时达到高峰(p<0.01),7d时开始下降(p<0.01)。再灌注后24h、48h,i/re组mmp-9表达较i/r组明显降低(p<0.05),7d时i/re组多于i/r组(p<0.05)。在ly-294002作用下,i/rel组再灌注后各时间点mmp-9表达接近i/re组水平(p>0.05)。8.电针对mcao/r大鼠大脑缺血皮质区cd34+mvd影响大鼠行mcao/r术后24h新生血管以单个细胞为主,管径较小,7dmvd增多,直径大小不等的各微血管并存。与i/r组相比,i/re组各时间点cd34+mvd显著增多(p<0.05),阻断pi3k作用后,i/rel组各时间点mvd均显著低于i/re组(p<0.05)。9.电针对mcao/r术后第7d各组大鼠脑梗死体积的影响脑缺血/再灌注后第7d,电针治疗组脑梗死体积较i/r组明显减少(p<0.05),ly294002特异性阻断pi3k作用后,电针刺激未能有效减少脑梗死体积(p>0.05)。结论:1.电针治疗可促进mcao/r大鼠神经功能恢复;2.电针治疗可促进骨髓epcs动员至外周血,该作用在阻断pi3k/akt信号转导通路后减弱,推测电针动员骨髓epcs入外周血与PI3K/AKT信号通路有关;3.电针刺激可增加大脑缺血皮质区CD34+微血管密度,减少脑梗死体积,该作用可能与电针通过调节大脑缺血皮质区p-AKT、eNOS、MMP-9的表达有关。推测电针发挥脑缺血后的脑保护作用可能与PI3K/AKT、eNOS/MMP-9信号通路介导EPCs归巢至脑缺血区有关。