TaqMan实时PCR检测Ki-67mRNA和UCA1Mrna方法的建立及初步临床就应用

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fogwl
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目的:建立一种简便、灵敏和特异的检测尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨其对膀胱癌诊断的应用价值。   方法:构建包含Ki-67和UCA1基因目的片段的重组质粒,以此为模板标准品,在荧光TaqMan的基础上建立检测Ki-67mRNA和UCA1mRNA的实时PCR方法,并进行方法学评价(包括线性范围、灵敏度、特异性、重复性)。以20例健康志愿者和25例非膀胱癌的泌尿系疾病患者作为对照组,用实时PCR方法检测45例对照组和48例膀胱癌组患者尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的表达。   结果:成功构建重组质粒pGEM-T-Ki-67和pGEM-T-UCA1,建立的实时PCR方法线性范围较宽(102~108copies/μL),重复性好(Ki-67和UCA1批内变异系数为0.31%和1.23%;批间变异系数为1.16%和1.48%,均小于3%)。Ki-67和UCA1分别以Ct值为31.6和32.5为诊断阈值,两者联合诊断的灵敏度和特异度分别为91.6%和86.6%,优于单一标志物的检测(P<0.05)。膀胱癌组Ki-67mRNA和UAC1mRNA高于非膀胱癌疾病组(P<o.05)和健康组(P<0.05),差异有统计学意义。膀胱癌组按病理分期分Tis/Ta、T1-2、T3-4三组,Ki-67mRNA和UAC1mRNA在Tis/Ta组低于T1-2组(P<0.05)、T1-2组低于T3-4组(P<0.05),差异有统计学意义。   结论:建立的TaqMan实时PCR方法简单、灵敏、特异、结果数据化,适合临床实验室用于尿Ki-67mRNA和UCA1mRNA的定量检测,有望用于膀胱癌的诊断、预后及复发监测,并有助于鉴别疾病分期。
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