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本文分为以下两个部分进行探讨： 第一部分 参附注射液通过抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12细胞损伤 目的：非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis，NASH）包括脂肪变性、肝炎、肝细胞损伤和纤维化。在本研究中，我们拟探讨一种传统中药-参附注射液（ShenFu preparation，SF）在体外肝脂肪变性模型中的保护作用和潜在机制。 方法：建立棕榈酸（Palmitic acid，PA）诱导鼠肝细胞损伤模拟离体NASH模型，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）和甘油三酯比色测定法（TG Colorimetric Assay）对细胞凋亡和细胞内甘油三酯水平（Intracellular triglyceride，iTG）进行评估；分别采用DCF（Dichlorofluorescein，二氯荧光素）和JC-1（5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素）测定活性氧（Reactive oxygen species，ROS）和线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平；使用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）评估细胞因子水平；用免疫印迹法（Immunoblot）检测JNK（C-Jun N-terminal kinase，c-Jun氨基末端激酶）、Nox4（NADPHoxidase4，NADPH氧化酶4）和NFκB（Nuclear factor kappa B，核因子kappa B）的表达变化。 结果：参附注射液减轻了棕榈酸诱导的细胞凋亡，以及降低了IL-6（白细胞介素-6）、IL-8（白细胞介素-8）和iTG的表达。经过棕榈酸处理的细胞中，添加参附注射液，可以降低Nox4和ROS的水平，同时MMP、MnSOD（锰超氧化物歧化酶）和过氧化氢酶的表达升高，表明线粒体功能障碍的发生。应用Nox4抑制剂-GKT137381抑制了由棕榈酸诱导产生的ROS和细胞凋亡的增加，同时降低了iTG的量，但并没有影响IL-8和IL-6的水平。参附注射液可以抑制棕榈酸诱导的磷酸化氨基末端激酶的上调。JNK抑制剂-SP600125抑制了由棕榈酸诱导的Nox4、IL-8、IL-6和iTG的增加。应用参附注射液后，可以阻断棕榈酸处理过的细胞中检测到的NFκB/p65核转位。BAY11-7082，一种IκB（Inhibitor of NF-κB）降解抑制剂，降低了由棕榈酸诱导的IL-8、IL-6以及iTG的量，而它只是轻微地降低了ROS含量，对细胞凋亡没有影响。 结论：参附注射液通过减少氧化应激和细胞因子的产生以及抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径，在预防肝细胞损伤过程中发挥了至关重要的作用。 第二部分 参附注射液能显著改善脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤 目的：肠道上皮细胞在肠道屏障功能的维护中起着至关重要的作用，而潜在的损伤机制还没有完全阐明。本研究拟对一种传统中药-参附注射液（ShenFu preparation，SF）在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的肠道上皮细胞损伤中的保护作用和分子机制进行系统探讨。 方法：采用HIEC-6细胞（Human intestinal epithelial cell，人肠上皮细胞系），单独应用LPS或LPS与SF联合应用来进行实验。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）对细胞凋亡进行评估。活性氧（ROS）水平是用DCF（Dichlorofluorescein，二氯荧光素）测定法测定的。经transwell培养板培养的单层人肠上皮细胞-6，通过FITC-albumin influx assay分析其渗透性。应用即时聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）来对细胞因子IL-1β（白介素-1β）、IL-6（白介素-6）和TNF-α（肿瘤坏死因子-α）进行定量分析。蛋白质印迹法（Western blot）用于测定胞浆IκBα（核因子κB抑制因子α）和核NFκB/p65亚基的含量。 结果：在脂多糖处理的细胞中发现了细胞凋亡、ROS和细胞因子的产生，以及NFκB/p65的核转位。DPI（二碘基苯）是一种特殊的ROS抑制剂，可减轻脂多糖诱导的细胞凋亡、细胞因子的产生和NFκB/p65核转位。BAY11-7082是一种IκB降解抑制剂，可以消除脂多糖诱导的细胞因子过剩。最有趣的是，参附注射液阻止了脂多糖诱导的细胞胞浆IκBα的降解，导致NFκB/p65的核分数降低。参附注射液剂量依赖性地抑制细胞凋亡的增加、ROS的产生和脂多糖诱导的细胞的渗透性。此外，参附注射液阻止了脂多糖介导的TNF-α和IL-6过度产生。 结论：参附注射液通过抑制ROS的产生和NFκB/p65核转位，进而导致炎性细胞因子的减少，来保护由脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤。